Mit mehr als 15 Jahren Erfahrung in der Herstellung von kundenspezifischen Proteinen und über 1500 erfolgreich produzierten Proteinen in 5 Systemen ist ProteoGenix ein führender Anbieter von schwierig zu exprimierenden rekombinanten Proteinen und Antikörpern. MEHR ERFAHREN
Mit mehr als 15 Jahren Erfahrung in der Herstellung von kundenspezifischen Proteinen und über 1500 erfolgreich produzierten Proteinen in 5 Systemen ist ProteoGenix ein führender Anbieter von schwierig zu exprimierenden rekombinanten Proteinen und Antikörpern. MEHR ERFAHREN
Wir bieten Services für die Proteinexpression und -aufreinigung im Labor- und Industriemaßstab auf jeder unserer 5 Plattformen zu günstigen Preisen sowie aufwändigere und maßgeschneiderte Pakete, in denen wir beispielsweise die Expressionsbedingungen für rekombinante Proteine in mehreren Systemen parallel oder erweiterte Proteinexpressionsbedingungen in einem bestimmten System testen. Unser Service beinhaltet sämtliche Schritte von der Gensynthese über die Konstruktion des Expressionsvektors bis hin zur Pilotherstellung in Kulturflaschenund zur Proteinexpression im Industriemaßstab in Fermentern und Bioreaktoren.
Unser Hochdurchsatz-Screening von Proteinexpressionsbedingungen ist darauf ausgelegt, Probleme im Zusammenhang mit Löslichkeit, Reinheit, Funktion, Produktivität, Refolding oder Formulierung zu überwinden. Dieses Versprechen einzulösen setzt Verfügbarkeit und Beherrschung aller bestehenden Technologien, Prozesse und Werkzeuge voraus. Auf Basis umfassender Erfahrung in der Expression von rekombinanten Proteinen beliebiger Art wie Antikörpern, Enzymen, Membranproteinen, Zytokinen usw. und unterschiedlichsten Spezies hat ProteoGenix ein vollständiges Instrumentarium für alle Herausforderungen entwickelt, um erstklassige Protein-Engineering-Services zu bieten, mit denen sich jede Herausforderung in diesem Bereich meistern lässt. Probieren Sie Pakete mit Garantie vom zuverlässigsten Proteinhersteller seiner Art aus.
E. coli
PROTEIN-
EXPRESSION IN E. COLI
Periplasmische Expression, Refolding-Tests,
Pakete mit Garantie, Endotoxinentfernung, kundenspezifische E.-coli-Expression,
Proteinherstellung in Bakterien
Multi system
MULTISYSTEM-
EXPRESSIONSPAKETE
Wenn das optimale System nicht bekannt ist: Tests in bis
zu 5 Systemen, Lieferung aufgereinigter Proteine aus
jedem System
B. subtilis
PROTEIN-
HERSTELLUNG IN B. SUBTILIS
Niedrige Endotoxinwerte,
Sekretion von rekombinanten Proteinen,
Proteincharakterisierung
Hefe
PROTEIN-
HERSTELLUNG IN HEFE
Saccharomyces cerevisia,
Pichia pastoris,
stabile Expression
HTP
HOCHDURCHSATZ-
EXPRESSIONS-SCREENING
Für schwierig zu exprimierende Proteine, über 1000
Expressionsbedingungen, Labormaßstab,
Hochdurchsatz-Screening
Insektenzellen
PROTEIN PRODUCTION IN
INSECT CELLS / BACULOVIRUS
Sf9, Sf21, Hi5, glycosylated proteins,
protein purification, baculovirus
production
Säuger
PROTEIN HERSTELLUNG
IN SÄUGERZELLEN
Transiente Expression, Herstellung von rekombinanten Antikörpern,
SEC- und IEX-Aufreinigung,
niedrige Endotoxinwerte, CHO, HEK293, BHK
Stabile Zelllinie
ENTWICKLUNG VON
STABILEN ZELLLINIEN
IP-freie Systeme, garantierte Ausbeute, Prozess-
entwicklung, stabile HEK293- und CHO-
Zelllinie
RAB
REKOMBINANTE MONOKLONALE
ANTIELLUNG KÖRPERHERST
Kostengünstige Herstellung,
garantierte Ausbeute,
HTP-Antikörpervarianten
Industriemaßstab
FERMENTER/BIOREAKTOR,
PROTEINHERSTELLUNG IN INDUSTRIEMASSSTAB
1 bis4.000 l in 5 Systemen,
Aufreinigungsservices in Industriemaßstab,
Prozessentwicklungsservices
Kundenspezifische Proteinherstellung –
Kundenstimme
„“ Ich habe mich kürzlich für ProteoGenix entschieden, um ein rekombinantes Protein in HEK293-Zellen herzustellen. Die hohe Produktivität und starke Aktivität des erhaltenen Proteins, wahrscheinlich durch die richtige Glykosylierung und Faltung, ermöglichte es uns, spannende Ergebnisse in Funktionsstudien zu erzielen und neue Meilensteine in unserem Forschungsprojekt zu erreichen. Die Qualität der Dienstleistung und die reibungslose und freundliche Kommunikation mit dem für unser Projekt verantwortlichen Kundenbetreuer waren ausschlaggebend für diesen Erfolg. Ich empfehle ProteoGenix gerne für die rekombinante Proteinproduktion. „
Warum ist ProteoGenix der richtige Partner für die Herstellung Ihres rekombinanten Proteins?
Why Choose ProteoGenix
MMehr als 16 Jahre herausragende Erfolgsgeschichte in der Herstellung von schwer exprimierbaren Proteinen
5 5 Proteinexpressionssysteme und ein vollständiges Instrumentarium zur Bewältigung jeder Herausforderung in der Proteinexpression
One-stop solution from gene to protein, process development and large scale production. Consequences: faster service, increased success rate, less administrative work.
IP-freie Stämme und Zelllinien
Herstellung im sehr kleinen bis großen Maßstab mit Chargen von 1 bis 4.000 l
Produktivität von bis zu 800 mg/l bei transienter Expression und 5 g/l bei stabiler Expression
Fermentierungsanlagen
Fallstudie:
Beispiel der Herstellung eines Beta-Glucosidase-Proteins in Insektenzellen
ERBRACHTER SERVICE
Wir wurden von einem Kunden beauftragt, ein rekombinantes Beta-Glucosidase-Proteins unter Nutzung eines Baculovirus-Expressionssystems (Erzeugung in Insektenzellen) herzustellen. Unser Kunde bestellte ein komplettes Insektenzellen-Paket mit Expressions- und Aufreinigungstests im Labormaßstab gefolgt von einer 1-l-Pilotherstellung und -aufreinigung. Wir erzielten mit der Labormaßstab-Expression eine Ausbeute von 370 mg/l und lieferten 60 mg an den Kunden. Die 1-l-Pilotherstellung war somit nicht mehr sinnvoll und wurde dem Kunden nicht in Rechnung gestellt. Der erbrachte Service bestand in den folgenden Schritten:
MOLEKULARBIOLOGIE
Chemische Synthese der für das Beta-Glucosidase-Protein codierenden cDNA nach Optimierung der Sequenz für die Expression in Insektenzellen. Anschließend Subklonierung in einem proprietären Expressionsvektor. Zur weiteren Aufreinigung Ergänzung einer für ein 6His-Tag codierenden Sequenz.
EXPRESSIONSTESTS
ERZEUGUNG VON P1-VIRUSSTOCK
Abbildung 1. Analyse der Insektenzellenexpression während der P1-Erzeugung.
Links: Coomassie-Blue-Färbung. Rechts: WB mit Anti-His-Antikörper (ECL-Substrat) „-“. Nicht transfizierte
Kontrollkultur. 1 und 2 sind Transfektionen mit 2 verschiedenen Bacmid-Klonen.
Schlussfolgerung des P1-Viruserzeugungsschritts
Eine dem Molekulargewicht des Beta-Glucosidase-Proteins entsprechende Proteinbande ist in der SDS-PAGE von nativen Proteinextrakten zu erkennen. Dieses Ergebnis wird durch Western Blot bestätigt (Abb. 1, grüne Pfeile). Für die Expressionstests wurde der rekombinante Bacmid-Klon Nr. 1 verwendet.
VIRUSAMPLIFIKATION UND EXPRESSIONSTESTS
Abbildung 2. Proteinexpressionstests mit P2-Stock.
Coomassie-Blue-Färbung. Links: Zelltyp 1.Rechts: Zelltyp 2. „-“. Negative Kontrollkultur.
Schlussfolgerung der Expressionstests
Die Expressionstests mit P2 bestätigen, dass das Target in hoher Konzentration in nativen Proteinextrakten vorliegt (Abb. 2, grüne Pfeile). Optimale Bedingungen für native Expression: Abbildung 2, roter Pfeil = Identifikationsgrenze
AUFREINIGUNGSTESTS
Abbildung 3. Proteinaufreinigungstest im Labormaßstab. Coomassie-Blue-Färbung.
Links: Aufreinigungsprofil. Rechts: Abschluss-QK des Aufreinigungspools.
IN = Input; FT = Flow-Through; W1–W3 = Waschschritte; E1–E9 = eluierte Fraktionen
Schlussfolgerung der Aufreinigungstests im Labormaßstab
Das rekombinante Beta-Glucosidase-Protein kann unter nativen Bedingungen hergestellt und aufgereinigt werden. Die Reinheit liegt bei ≥ 95 % und die Herstellungs-/Aufreinigungsausbeute bei ca. 370 mg/l. Das Baculovirus-Expressionssystem war die richtige Wahl für dieses Protein.
Welches System sollten Sie für die Herstellung Ihres rekombinanten Proteins wählen?
VERGLEICH DER 5 VON PROTEOGENIX ANGEBOTENEN EXPRESSIONSSYSTEME –
PROKARYOTISCHE VS. EUKARYOTISCHE ZELLEXPRESSIONSSYSTEME
Die nachstehende Tabelle gibt einen allgemeinen Überblick über die jeweiligen Vorteile der fünf unterschiedlichen heterologen Proteinexpressionssysteme zur Herstellung von rekombinanten Proteinen. Mehr Sterne bedeuten bessere Leistung.
Expressions- system |
Zeit | Kosten | PTM | Niedrige Endotoxinwerte | Einfache Hochskalierung des Prozesses | Sekretion |
E. coli | **** | **** | * | * | *** | * |
B. subtilis | *** | *** | * | **** | *** | ** |
Hefe (P. pastoris, S. cerevisiae) |
* | *** | ** | **** | ** | ** |
Baculovirus/ Insektenzellen |
* | ** | *** | **** | * | *** |
Säugerzellen | *** | * | **** | **** | ** | **** |
Die nachstehende Tabelle gibt einen allgemeinen Überblick über die jeweiligen Vorteile der fünf unterschiedlichen heterologen Proteinexpressionssysteme zur Herstellung von rekombinanten Proteinen. Mehr Sterne bedeuten bessere Leistung.
Expressions- system |
Zeit | Kosten | PTM | Niedrige Endotoxinwerte | Einfache Hochskalierung des Prozesses | Sekretion |
E. coli | **** | **** | * | * | *** | * |
B. subtilis | *** | *** | * | **** | *** | ** |
Hefe (P. pastoris, S. cerevisiae) |
* | *** | ** | **** | ** | ** |
Baculovirus/ Insektenzellen |
* | ** | *** | **** | * | *** |
Säugerzellen | *** | * | **** | **** | ** | **** |
Expressionssystem | Zeitbedarf | Preis |
E. coli | 3–6 Wochen | Schon ab 1 650€ |
B. subtilis | 4–6 Wochen | |
Hefe (P. pastoris, S. cerevisiae) |
6–7 Wochen | |
Baculovirus/ Insektenzellen |
8–11 Wochen | |
Säugerzellen | 7–9 Wochen |
ZEITBEDARF UND PREIS
Expressionssystem | Zeitbedarf | Preis |
E. coli | 3–6 Wochen | Schon ab 1 650€ |
B. subtilis | 4–6 Wochen | |
Hefe (P. pastoris, S. cerevisiae) |
6–7 Wochen | |
Baculovirus/ Insektenzellen |
8–11 Wochen | |
Säugerzellen | 7–9 Wochen |
Leistungsumfang
Expressions- und Aufreinigungsprüfung im Labormaßstab mit Test zahlreicher Expressionsbedingungen
1-l-Herstellung und -Aufreinigung
NICHT-ERSCHÖPFENDE MULTI-EXPRESSIONSSYSTEM-PAKETE
Paketcode | Typ | Systeme | Preis |
ATX-PTR4S01 | 4-System- Expressionspaket |
E. coli/Hefe/Baculovirus/ Säugerzellen |
Schon ab 2 450€ |
ATX-PTR3S05 | 3-System- Expressionspaket |
B. subtilis/Hefe/Baculovirus | |
ATX-PTR2S02 | 2-System- Expressionspaket |
E. coli/Baculovirus/ |
Das gängigste System zur Aufreinigung von rekombinanten Proteinen ist E. coli (Escherichia Coli). Es ist tatsächlich das einfachste, schnellste und wirtschaftlichste System für die kundenspezifische Proteinexpression. Bakterienkulturen wachsen erheblich schneller als Insektenzellen, Säugerzellen oder Hefen und machen es somit möglich, eine große Zahl unterschiedlicher Bedingungen leichter und schneller zu testen. Es stehen mehr Lösungen für Tests zur Verfügung, sodass eine höhere Erfolgsquote bei der Expression rekombinanter Proteine möglich ist. Die transienten Expressionsausbeuten an rekombinanten Proteinen sind ebenfalls im Allgemeinen deutlicher höher als bei Hefe, Baculovirus/Insektenzellen oder Säugerzellen. Die Herstellung rekombinanter Proteine in E. coli ist häufig die von ProteoGenix vorgeschlagene bevorzugte Lösung, wenn die Endanwendung große Proteinmengen erfordert, wie etwa Kristallographie und Nuklearmagnetresonanz (NMR), und keine posttranslationalen Modifikationen (PTM) benötigt werden. Die größten Nachteile des E.-coli-Systems bestehen in der hohen Konzentration von Endotoxinen in der Endprobe sowie dem Fehlen von posttranslationalen Modifikationen. Die Endotoxine können entfernt werden, auch wenn dies im industriellen Maßstab wenig praktikabel ist, während es für die PTM-Problematik kaum eine andere Lösung als die Nutzung eines anderen Expressionssystems gibt. Mit diesen fünf Systemen sind wir in der Lage, die Anforderungen eines weiten Spektrums von Proteinsyntheseaufträgen zu erfüllen und können deshalb bei der Synthese von rekombinanten Proteinen eine Erfolgsquote von 95 % vorweisen. Wir arbeiten stets an der Integration neuer Systeme und Lösungen, um allen Kunden, die auf der Suche nach Dienstleistungen zur Herstellung von rekombinanten Proteinen mit hohen Qualitätsstandards sind, den besten Service zu bieten.
Wenn Sie unsicher sind, welches System Sie wählen sollten, leiten wir Sie als führender Hersteller vom Gen bis zum Protein und bestimmen gemeinsam mit Ihnen die optimale Strategie für Ihren Zeitrahmen, Ihr Budget und die gewünschten Proteineigenschaften.
Team, Kapazität, Organisation
Unsere Labore zur Herstellung von rekombinanten Proteinen gliedern sich in mehrere Plattformen und unterstützende Labore, um beste Servicequalität, höchste Produktreinheit, das absolut niedrigste Kontaminationsrisiko und die beste Organisation für einen schnellen und zuverlässigen Service bereitzustellen.
Wir verfügen über eine Plattform für jedes unserer fünf Systeme sowie ein separates Qualitätskontrolllabor, ein molekularbiologisches Labor, ein Verpackungslabor usw. Jede Plattform wird von erfahrenen Teamleitern verwaltet, die dafür sorgen, dass die gelieferten Proteine den Kundenspezifikationen entsprechen. Mit bis dato mehr als 1500 hergestellten Proteinen und auf jeweils ein System spezialisierten Teams verfügen wir über die beste Expertise für jedes dieser Systeme.
Anwendungsgebiete für die Expression
von rekombinanten Proteinen
Die rekombinanten Proteine von ProteoGenix kommen in einem weiten Spektrum von Anwendungen zum Einsatz und unsere Kunden sind in Branchen wie pharmazeutische Industrie, Diagnostika, Biotechnologie, Agro- und Lebensmittelindustrie, Nutzpflanzenwissenschaft, neue Energien, Kosmetik und nationalen Forschungseinrichtungen tätig.
Einige Beispiele für Anwendungsgebiete: