SERVICIOS
GARANTIZADOS
SERVICIOS
GARANTIZADOS
Si está trabajando en un proyecto para el que los ensayos disponibles en el mercado, incluso los kits de ELISA, no le han dado una validación o consistencia suficientes, el desarrollo de un ensayo personalizado es la mejor forma para llevar su investigación a buen puerto. Y en materia de servicios de desarrollo de ensayos personalizados, tanto para investigación, obtención del marcado CE, o DIV (IVD en ingles), ProteoGenix es la primera elección de los líderes en la industria de las ciencias biológicas, las instituciones y los investigadores académicos independientes.
Los servicios de desarrollo de ensayos personalizados de ProteoGenix son exhaustivos e integrales, es decir, comprenden todos los aspectos, desde el diseño de la estrategia de ensayo personalizada adecuada, en colaboración con usted, hasta el suministro del kit piloto. Los ensayos ELISA tipo sándwich y ELISA competitivos son los formatos que desarrollamos más habitualmente.
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Desarrollo de ELISA tipo sándwich garantizado
Garantizamos la entrega del antígeno y un par de anticuerpos que detecten su diana en sus propias muestras. Al final del proceso, le proporcionamos muestras de los anticuerpos y el antígeno para verificar su conformidad con las especificaciones iniciales. Si queda satisfecho, pagará la cantidad íntegra. En caso contrario, pagará el 50 % del coste total únicamente si hemos sido capaces de desarrollar un ensayo ELISA tipo sándwich para la detección del antígeno. Por lo tanto, corremos con la mayor parte del riesgo de su proyecto diagnóstico o de I+D
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Desarollo de ensayos personalizados de ProteoGenix :
Descripción de los servicios y del proceso
Después de haber ayudado a un gran número de corporaciones, laboratorios e investigadores independientes con nuestro servicios de desarrollo de ELISA personalizados, hemos conseguido definir y adaptar a la perfección un procedimiento de desarrollo de ensayos personalizados riguroso, que tiene en cuenta todos los aspectos de su investigación, con el fin de ofrecer soluciones de ensayo adecuadas tanto para investigación como para marcado CE y DIV. A continuación, presentamos nuestro plan de servicios de ensayos personalizados:
Estudio de las especificaciones del ensayo
Una vez que nos informe de sus requisitos, estudiaremos detalladamente las especificaciones que nos ha entregado para entender cuáles son los objetivos de su investigación.
Diseño de una estrategia de ensayo personalizada
Una vez que hayamos determinado que los kits para ELISA, los ELISA tipo sándwich o los pares de anticuerpos existentes no son suficientes para satisfacer sus necesidades, (especificidad, sensibilidad, reactividad cruzada, etc.), diseñaremos, en colaboración con usted, una estrategia totalmente personalizada para el desarrollo de su ensayo. Esta es una etapa muy importante, ya que determinará el éxito de su proyecto. Hay muchas estrategias posibles para desarrollar un ensayo que cumpla con sus requisitos concretos, y todas las etapas del proceso son críticas.
Síntesis de genes
Nuestra estrategia de desarrollo de ensayos personalizados comienza a materializarse con la síntesis de ADNc bicatenario. Gracias a los controles de calidad optimizados que realizamos para guiar nuestro sistema, garantizamos una secuenciación con una exactitud del 100 % y una eficiencia global superior al 99,9 %. Además, perfeccionaremos nuestro protocolo especializado en la síntesis de genes, con un ciclo de mutagénesis para eliminar cualquier traza de error posible. Con los años, hemos consolidado la formidable reputación de ser los mejores proveedores de servicios a la hora de conseguir con éxito la producción de reactivos personalizados, y este éxito parte de una optimización y síntesis de genes de gran precisión. La optimización y el diseño de construcciones génicas son muy importantes para la producción del antígeno más adecuado en la etapa siguiente.
Producción de Proteínas/Péptidos
La producción precisa de cadenas de proteínas o péptidos recombinantes con un rendimiento suficiente como para permitir el desarrollo del anticuerpo es una etapa vital en el desarrollo de ensayos personalizados. Gracias a nuestra dilatada experiencia en este campo, garantizamos que los procesos de desarrollo de nuestros ELISA competitivos personalizados, ELISA tipo sándwich personalizados o de cualquier otro formato de ensayo se asientan sobre una base sólida, la de los anticuerpos desarrollados hasta ahora con una eficiente producción de antígeno de alta pureza.
La producción de proteínas/péptidos, en función de los requisitos y objetivos de su proyecto, también se puede realizar mediante expresión para la entrega de la muestra en los sistemas más adecuados, que incluyen E. coli, B. subtilis, levaduras, células de insecto (baculovirus), y células de mamífero, con el fin de diversificar los procedimientos posteriores durante el desarrollo de ensayos. Si procede, nuestro equipo de científicos también expresará la proteína o el péptido recombinante en todos estos sistemas en paralelo con el fin de encontrar las condiciones de expresión óptimas y mejorar la validez del resultado final, es decir, de los anticuerpos utilizados en el ensayo personalizado que nos haya encargado.
Desarrollo de anticuerpos primarios
Procederemos con gran cuidado a la hora de desarrollar anticuerpos primarios a partir de la muestra de antígeno generada en la etapa anterior. Como sabe, este es quizá el proceso más sensible del desarrollo de ensayos personalizados, y está es la razón por la que hemos desarrollado a lo largo de los años una experiencia inigualable en el desarrollo de anticuerpos monoclonales y policlonales.
Generación de anticuerpos monoclonales
- Desarrollo de hibridomas con inmunización genética o inmunización con antígeno proteico
- Técnica de presentación en fagos avanzada, con cribado de librerías derivadas de animales inmunizados o no inmunizados
- Alto nivel de garantía
- Si procede, entrega independiente de los anticuerpos monoclonales
Generación de anticuerpos policlonales
- Múltiples sistemas animales para una generación precisa de anticuerpos policlonales, con inmunización genética o simplemente mediante inmunización con antígeno proteico
- Alto nivel de garantía
- Si procede, entrega de los anticuerpos policlonales
Servicios analíticos
Tras la producción con éxito de los anticuerpos primarios deseados, pondremos en marcha nuestros servicios analíticos. Antes de la conjugación, ofrecemos tres técnicas avanzadas de medición de la afinidad de anticuerpos sin marcadores para evaluar los niveles de interacción biomolecular.
- Resonancia de plasmón superficial (SPR de Biacore™)
- Adquisición de imágenes de resonancia de plasmón superficial (SPRi de HORIBA Scientific®)
- Interferometría de biocapa para detección rápida en tiempo real (Octet® RED de PALL ForteBio)
Conjugación de anticuerpos para ELISA tipo sandwich
La siguiente etapa de nuestros servicios de desarrollo de ensayos personalizados es la conjugación de anticuerpos. Gracias a la pureza de los anticuerpos producidos en la etapa anterior, podemos garantizar que el resultado final de la conjugación de anticuerpos no contendrá cadenas de proteína o grupos amino dispersos que puedan influir en el proceso de conjugación. Utilizando las técnicas más avanzadas, y con la posibilidad de elección de múltiples métodos de marcado, no escatimamos esfuerzos para superar con éxito esta etapa vital en el desarrollo de ensayos personalizados.
- Conjugación rápida
- Proceso de una sola etapa para mejorar la exactitud
- Conjugación de un mínimo de 10 anticuerpos
Selección de pares de anticuerpos para ELISA tipo Sandwich
Trabajando en la misma línea que con los procesos de desarrollo de anticuerpos primarios (consulte la etapa 5), determinamos y desarrollamos los mejores pares de anticuerpos (anticuerpos de revestimiento y anticuerpos de detección). Llevamos a cabo al menos 90 ensayos de pares de anticuerpos para asegurarnos de que se seleccione el par más adecuado. La exactitud de un kit de ELISA tipo sándwich dependerá totalmente de la selección adecuada del par de anticuerpos y, por tanto, es importante que esta etapa la realice un proveedor de servicios de desarrollo de ensayos personalizados con experiencia como ProteoGenix, que domina todas las etapas del proceso, desde la síntesis de genes hasta la producción piloto de kits.
- Selección precisa de pares de anticuerpos
- Procedimiento que ahorra tiempo
- Técnicas de selección avanzadas para obtener pares únicos
- Ensayos de selección exhaustivos (al menos 90)
Desarrollo y optimización de protocolos de ELISA
Basándonos en la exclusividad del antígeno diana y la sensibilidad del anticuerpo deseado, desarrollamos un protocolo de ELISA totalmente optimizado (ELISA tipo sándwich, ELISA competitivo u otro formato). El desarrollo del protocolo de un ELISA tipo sándwich o un ELISA competitivo es una de las últimas etapas del proyecto de desarrollo de ensayos personalizados. Normalmente, el propósito de esta etapa es optimizar la señal, sensibilidad y reproducibilidad, así como reducir el ruido de fondo al mínimo.
A continuación, el protocolo de ELISA tipo sándwich o ELISA competitivo personalizado se somete a múltiples ajustes de proceso con el fin de optimizar frente al antígeno:
- La concentración del par de anticuerpos
- La concentración de diluyente
- La concentración del conjugado enzimático
- La concentración de solución amortiguadora o tampón
- La intensidad/exactitud de la señal
- El método de bloqueo
La validación del ensayo
Para finalizar el proceso de desarrollo del ELISA personalizado, se valida el ensayo personalizado desarrollado en las muestras biológicas proporcionadas para garantizar que se pueda realizar con éxito la detección de la una o más proteínas endógenas en cuestión. El ensayo de validación también proporciona una garantía real de que la detección del antígeno diana es consistente con la proteína o el péptido recombinante desarrollados.
Producción piloto de Kits de ELISA
Una vez que el ensayo personalizado está totalmente desarrollado y validado, solicitamos la aprobación de nuestro cliente para seguir adelante con la producción de kits. En línea con nuestra rigurosa estrategia en lo que respecta a todos los procedimientos que componen el desarrollo de ensayos personalizados, suministramos todos los reactivos necesarios totalmente desarrollados y optimizados para facilitar el uso del ensayo personalizado en su propio laboratorio. Por último, suministramos docenas o cientos de kits listos para usar que incluyen placas ya revestidas y todos los reactivos necesarios para realizar los ensayos.
¿Por qué elegir los servicios de desarrollo de ensayos personalizados de ProteoGenix?
- Solución integral, desde la síntesis de genes, hasta el suministro de kits piloto
- Servicios de ELISA tipo sándwich personalizados y garantizados aptos para su aplicación
- Precios competitivos, paquetes integrales de ensayos personalizados
- Plazos de entrega garantizados: tan solo 8 meses desde la síntesis de genes hasta el suministro del lote de kits piloto obtenidos tras el desarrollo de su ensayo ELISA tipo sándwich personalizado
- Asistencia integral por parte de nuestros técnicos doctorados expertos en el desarrollo de ELISA tipo sándwich y ELISA competitivos personalizados
- Expertos en ELISA líderes en la industria
¡Llevemos juntos su proyecto de investigación al éxito!
Con equipos de vanguardia, un equipo de científicos altamente cualificados y con gran experiencia, y gracias a la reputación que nos precede, en ProteoGenix nos comprometemos a proporcionarle los mejores servicios de desarrollo de ensayos personalizados a un precio competitivo, con amplias garantías, con controles de calidad durante todo el proceso y con plazos de entrega cortos.
Una decisión acertada le ahorrará mil problemas. ¡Déjenos cargar con la responsabilidad de desarrollar y validar sus ensayos personalizados para que pueda llevar su investigación mucho más lejos!
Haga clic en «Contacte con nosotros» en la parte derecha de la pantalla para ponerse en contacto con nosotros, preguntarnos sus dudas o solicitar un presupuesto. Siga leyendo para informarse acerca de cómo podemos ayudarle desde nuestros servicios de desarrollo de ensayos personalizados a ahorrar tiempo y esfuerzo, así como a rentabilizar su proyecto.
Nuestra experiencia en el desarrollo de ELISA tipo sándwich
Habiendo desarrollado cientos de ensayos desde 2003, ProteoGenix ha consolidado una experiencia categórica en diversos campos. Las siguientes son algunas de las razones por la que destacamos por encima de nuestros competidores en materia de desarrollo de ensayos personalizados:
- Desarrollo de ensayos personalizados desde el principio (número de acceso de la diana)
- Soluciones integrales para ensayos personalizados, desde la la síntesis de genes, hasta el suministro de kits piloto
- Todos los procesos implicados se someten a estrictas directrices de control de calidad
- Experiencia en dianas únicas y ensayos de altas prestaciones/alta sensibilidad
En ProteoGenix, contamos con un equipo de eminentes científicos, con una formación académica ilustre y una experiencia en la investigación y la industria inigualable. Teniendo por bandera esta riqueza de conocimientos técnicos especializados, contamos con una experiencia incomparable en biología molecular, ingeniería de proteínas, anticuerpos e inmunología la síntesis de péptidos.
¿Por qué apostar por el desarrollo de ensayos personalizados?
A pesar de que ProteoGenix ofrece diversos ELISA personalizados polivalentes, que incluyen ELISA directos, ELISA indirectos, ELISA tipo sándwich y ELISA competitivos, con frecuencia, el desarrollo de ensayos personalizados representa la mejor solución cuando se necesita un kit de validación/producción para proyectos que implican dianas o marcadores muy específicos. Trabajamos con técnicas de ELISA tipo sándwich y ELISA competitivo automatizadas para desarrollar las soluciones de ensayo que mejor se adapten a sus necesidades. En función de la sensibilidad y tecnología solicitadas, incluso podemos desarrollar ensayos colorimétricos y fluorescentes.
Nuestros servicios incluyen el desarrollo de ensayos no solo para el descubrimiento de fármacos, sino también con fines diagnósticos o de investigación.
Desarrollo de ensayos personalizados con ProteoGenix
Resumen de los servicios
Gracias a nuestro compromiso histórico con la comunidad académica y de investigación a nivel industrial de todo el mundo, en ProteoGenix sabemos qué es necesario aunar nuestras sinergias y contribuir a las incontables horas que invierte en su investigación. Teniendo siempre en mente las necesidades de los investigadores, hemos diseñado un sistema integral de desarrollo de ensayos personalizados que le liberará de la presión que suponen la validación y la repetición de ensayos.
CARACTERÍSTICAS DESTACADAS
- Garantías de éxito inigualables
- Diseño de una estrategia de desarrollo de ensayos que se adapta a la perfección a los objetivos de su investigación
- Amplia variedad de formatos de ensayo
- Alto grado de personalización, de conformidad con el numero de acceso de la diana o las especificaciones del biomarcador que nos proporcione
- Descubrimiento de biomarcadores mediante estudios de la interacción ADN-proteína
- Paquetes integrales, desde la síntesis de genes, hasta el suministro de kits piloto
- Costes competitivos, sin tasas ocultas
- Asistencia posventa integral por parte de nuestro equipo de experimentados científicos
¿QUÉ OBTIENE CON NUESTROS SERVICIOS DE DESARROLLO DE ENSAYOS PERSONALIZADOS?
- Diseño integral de la estrategia de desarrollo de ensayos
- Estimaciones de plazos para todo el proyecto
- Desarrollo de ensayos personalizados, desde la síntesis de genes hasta el suministro de kits piloto adecuados (ELISA tipo sándwich/ELISA competitivo/otros)
- Validación de ensayos
- Suministro de todos los reactivos
- Asistencia técnica para la transferencia del ensayo
- Documentación
- Asistencia técnica durante su implementación
- Controles de calidad exhaustivos
- Suministro de kits piloto
Desarrollo de ensayos personalizados:
áreas de aplicación habituales
Un criterio básico a la hora de decidir si su proyecto necesita un kit de ensayo desarrollado de forma personalizada o le bastará con uno comercializado estándar es evaluar:
- La exclusividad de la diana en cuestión
- La calidad de los kits existentes
- La capacidad de los kits existentes para cumplir con sus especificaciones en términos de sensibilidad, formato de ensayo, especificidad de las especies o reactividad cruzada
- La necesidad de tener su propio ensayo para contar con una ventaja competitiva frente a sus competidores y reducir el riesgo de que lo copien
Si no es capaz de decidirse, póngase en contacto con nosotros sin compromiso y estaremos encantados de aconsejarle.
A continuación, presentamos las áreas de aplicación más habituales en las que destaca el desarrollo de ensayos personalizados:
- Biomarcadores para el descubrimiento y desarrollo de fármacos
- Inmunoensayos para la determinación de la eficacia de vacunas
- Monitorización de la administración de fármacos
- Desarrollo de kits para diagnóstico o pronóstico
- Desarrollo y optimización de procesos
- Investigación industrial y académica básicas
- Validación de la expresión de la diana en diferentes líneas celulares o en extractos de células
- Bioensayos para el análisis de agua y alimentos
- Cribado avanzado de la toxicidad
- Control de procesos industriales
- Análisis de muestras medioambientales
Ejemplo de desarrollo de un ensayo ELISA tipo sándwich:
un estudio de caso decisivo
La mejor forma de demostrar nuestra experiencia en el desarrollo de ensayos personalizados es compartir un estudio de caso representativo de un ensayo de biomarcadores que hemos desarrollado.
OBJETIVOS: IDENTIFICACIÓN DE UN BIOMARCADOR PARA EL CÁNCER DE PRÓSTATA EN ETAPAS TEMPRANAS Y DESARROLLO DE UN KIT DE ENSAYO DEL BIOMARCADOR MEDIANTE ELISA TIPO SÁNDWICH
El objetivo de este proyecto era desarrollar y optimizar un ensayo de biomarcadores para detectar niveles altos de un biomarcador específico para una o más etapas tempranas del cáncer de próstata previamente identificado. El grupo de donantes de suero de muestra para la validación consistió en individuos sanos, individuos con cáncer de mama e individuos diana, es decir, individuos con cáncer de próstata.
DESCUBRIMIENTO DEL BIOMARCADOR
Se empleó el protocolo de cribado estándar del sistema de híbrido simple (OHS en inglés) para identificar los reguladores de una diana proteica habitual de los fármacos anticancerígenos. La figura siguiente (FIGURA 1) ilustra el principio de trabajo general que se esconde tras el cribado mediante el sistema OHS.
Principio del sistema OHS
Identificación in vivo de una proteína de unión al ADN gracias a la fusión con GAL4-AD y activación de un gen indicador
DESARROLLO DEL PROTOCOLO DE ELISA TIPO SÁNDWICH PARA EL BIOMARCADOR DIANA
Para desarrollar un protocolo de ELISA tipo sándwich para el biomarcador descubierto mediante el cribado con el sistema OHS en la etapa preliminar del proyecto de desarrollo de un ensayo personalizado, se siguieron las etapas que se detallan a continuación.
- Se produjeron cadenas de proteína recombinante en volúmenes suficientes y con una pureza por encima del valor umbral.
- Se desarrollaron 10 anticuerpos monoclonales de alta afinidad en un sistema de hibridoma.
- Los 10 anticuerpos monoclonales desarollados se fabricaron, purificaron y conjugaron.
- Se adoptó una estrategia de selección de pares de anticuerpos que implicó el ensayo de 90 pares para identificar el par más adecuado.
- Se desarrolló el protocolo de ELISA tipo sándwich óptimo para alcanzar un umbral de sensibilidad suficiente como para detectar la diana en el suero de los pacientes.
- El par de anticuerpos que resultó ser el más adecuado se evaluó sobre muestras biológicas etiquetadas de un grupo de donantes lo suficientemente grande (tanto donantes sanos como pacientes con cáncer).
- Se realizó un mapeo de epítomes y, posteriormente, se crearon bancos de células a dos niveles, un banco de células maestras (MCB en inglés) y un banco de células de trabajo (WCB).
PROCESAMIENTO DE DATOS: DETERMINACIÓN DEL MEJOR PAR PARA EL ENSAYO ELISA TIPO SÁNDWICH
Como se describe en la etapa 4 anterior, el experimento de selección de pares de anticuerpos derivó en un grupo de datos muy fiables que se tabularon y analizaron gráfica y empíricamente para determinar el par más adecuado.
La gráfica siguiente (GRÁFICA 1) detalla los resultados del experimento realizado combinando diversos pares de anticuerpos para seleccionar el mejor par de anticuerpos.
GRAPH 1: GRÁFICA 1: DETERMINACIÓN DEL MEJOR PAR PARA EL ENSAYO ELISA TIPO SÁNDWICH
Como se ve claramente, los anticuerpos de detección 4B y 5B forman un par extraordinariamente bueno con el anticuerpo de revestimiento 17. Entre estos dos candidatos, se observó que el par de anticuerpo de detección 5B y anticuerpo de revestimiento 17 constituía un par sistemáticamente mejor. Por tanto, el análisis empírico y experimental de más de 90 pares nos permitió concentrarnos en el mejor par de anticuerpos.
PROCESAMIENTO DE DATOS: OPTIMIZACIÓN DEL ENSAYO ELISA TIPO SÁNDWICH
Una vez determinado el mejor par de anticuerpos, y utilizando una estrategia de ELISA tipo sándwich, se creó un protocolo de detección optimizado específicamente. Esto implicó la elección y el uso de tampones de bloqueo apropiados, junto con periodos de incubación, diluciones de anticuerpo y otros parámetros adecuados.
La gráfica siguiente (GRÁFICA 2) representa los valores de concentración frente a la densidad óptica (OD) asociada, lo que nos da una curva empírica precisa y fiable que se puede utilizar para su extrapolación futura como parte del protocolo de ELISA completo para este ensayo de biomarcador.
GRAPH 2: GRÁFICA 2: DETERMINACIÓN DEL UMBRAL DE DETECCIÓN EN MUESTRAS DE SANGRE
Conclusión: este protocolo de ELISA tipo sándwich nos permite detectar el biomarcador a una concentración ≤ 0,2 ng/ml en muestras de sangre de pacientes.
PROCESAMIENTO DE DATOS: EVALUACIÓN MEDIANTE ELISA TIPO SÁNDWICH PERSONALIZADO EN MUESTRAS BIOLÓGICAS
La evaluación del protocolo de ELISA tipo sándwich se llevó a cabo utilizando muestras de sangre de donantes sanos, pacientes con cáncer de mama y pacientes con cáncer de próstata. Se utilizó el protocolo de ELISA optimizado para ensayar los niveles de biomarcador en las muestras en comparación con los niveles de APE (PSA en inglés).
La gráfica siguiente (GRÁFICA 3) ilustra los altos niveles de biomarcador prostático específico en los pacientes con cáncer de próstata detectados mediante el protocolo de ELISA tipo sándwich personalizado desarrollado en ProteoGenix, lo que nos permite la discriminación categórica entre pacientes sin cáncer de próstata (donantes sanos y pacientes con cáncer de mama) y pacientes con cáncer de próstata. Esta discriminación fue mucho más clara y concluyente que cuando se ensayó el biomarcador PSA.
GRAPH 3: DETERMINACIÓN DEL NIVEL DE ANTÍGENO PROSTÁTICO ESPECÍFICO EN MUESTRAS DE SANGRE DE PACIENTES SANOS Y CON CÁNCER (ELISA TIPO SÁNDWICH)
Se detecta un gran aumento del nivel de biomarcador prostático específico en los pacientes con cáncer de próstata.
CONCLUSIÓN
Este estudio de caso representa mucho más que una simple exposición de hechos, cifras y datos. Tal progreso y la capacidad de personalizar el proceso de desarrollo del ensayo hasta este grado, que de lo contrario resultaría una tarea larga, meticulosa y tediosa, supone una gran ventaja para los investigadores. El desarrollo de ensayos personalizados no solo proporciona soluciones personalizadas para sus proyectos, sino que también ahorra tiempo, energía y otros recursos valiosos que, de lo contrario, invertiría en intentar que funcionaran los ensayos estandarizados.
Principio de desarrollo del ensayo ELISA tipo sándwich
Normalmente, el ensayo ELISA tipo sándwich es un método para ensayar una proteína (en azul en la gráfica que se presenta a continuación) en diferentes clases de muestras, tales como muestras de suero, utilizando un par de anticuerpos. El anticuerpo de captura (en verde en la gráfica) se inmoviliza sobre el plástico de placas de 96 pocillos, mientras que el anticuerpo de detección (en rojo en la gráfica) permitirá que se libere una señal de detección. En un ELISA tipo sándwich, el anticuerpo de detección puede estar conjugado directamente a biotina, HRP o AP (en amarillo en la gráfica), pero, si el anticuerpo de revestimiento procede de una especie huésped diferente, también es posible utilizar un anticuerpo secundario conjugado para detectarlo.
