Gracias a nuestra tasa de éxito, superior al 98 % en más de 300 proyectos de generación de anticuerpos monoclonales, ProteoGenix puede ofrecer las mayores garantías del mercado para el desarrollo de hibridomas. ¡Nos enorgullece poder compartir este éxito con usted, le ofrecemos la posibilidad de no pagar si no queda satisfecho con el resultado en su propia aplicación!
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el desarollo de su hibridoma?
Máximas garantías
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Tasa de éxito elevada
¡Más de 300 anticuerpo monoclonales generados y tasa de éxito superior al 98 %!
Diversidad de estrategias de inmunización
Inmunización con proteínas, péptidos, ADN,… ¡Ofrecemos todos los tipos de estrategias de inmunización!
Los estándares más rigurosos
ProteoGenix aplica los estándares más rigurosos y se compromete con el bienestar animal en su uso científico.
Cribado en la aplicación deseada
¿Está desarrollando una herramienta diagnóstica? Citometría de flujo, ELISA tipo sándwich, IHC, IF, IP, WB,… ¡Su anticuerpo estará garantizado en la aplicación que elija!
Expertos en anticuerpos terapéuticos
¿Desea desarrollar un anticuerpo terapéutico? Diseño de formatos alternativos (anticuerpos biespecíficos, ADC), humanización, maduración de la afinidad,… Utilice nuestra gama de servicios y !pase directamente a la fase clínica!
Elija su paquete de desarrollo de hibridomas garantizado
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| Nombre del paquete | Código | Síntesis de genes y producción de antígenos | Inmunización, fusión, cribado mediante ELISA y subclonación | Cribado en la aplicación deseada | Producción de anticuerpos purificados | Conjugación de anticuerpos e identificación de pares mediante ELISA |
|---|---|---|---|---|---|---|
| ELISA convencional | ATX-PACK1M | X | ||||
| ELISA prémium garantizado | ATX-PACK2M | X | X | X | ||
| WB prémium garantizado | ATX-PACK3M | X | X | X | X | |
| Citometría de flujo prémium garantizada | ATX-PACK4M | X | X | X | X | |
| ELISA tipo sándwich prémium garantizado | ATX-PACK5M | X | X | X | X | X |
| IF prémium garantizada | ATX-PACK6M | X | X | X | X | |
| IP prémium garantizada | ATX-PACK7M | X | X | X | X | |
| Péptido garantizado | ATX-PACK8M | X | X | X | ||
| Paquete de modificación específica garantizado | ATX-PACK9M | X | X | X | ||
| IHC prémium garantizada | ATX-PACK10M | X | X | X |
Testimonio de desarrollo de hibridomas
«Colaboramos en un proyecto de generación de un anticuerpo monoclonal que reconoce una mutación de un aminoácido en una proteína de la superficie celular asociada al cáncer. A pesar de que el proyecto era un auténtico desafío técnico, conseguimos generar un clon de hibridoma que producía el anticuerpo deseado. Durante el curso del proyecto, encontramos otros clones que reconocían epítopos adyacentes, y ProteoGenix realizó un gran esfuerzo para realizar subclonaciones adicionales con el fin de garantizar la entrega de clones que funcionaran a la perfección. En resumen, ProteoGenix se esforzó en todo momento por garantizar la máxima calidad del producto y la satisfacción del cliente, y el gestor de cuentas encargado de nuestro proyecto nos ofreció su experiencia y ayuda inmediata en todo momento.»
Dr. rer. nat. Rudolf Übelhart, Jefe de proyecto, Instituto de Inmunología de la Universidad de Ulm
Nuestro servicio de desarrollo de hibridomas
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DISEÑO DE ANTÍGENOS
Definición de la estrategia de inmunización más adecuada.
Diseño de antígenos: síntesis de péptidos, síntesis de genes y producción de proteínas en 2 sistemas o inmunización con ADN.
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INMUNIZACIÓN
Inmunización de 5 ratones con nuestro propio protocolo optimizado.
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FUSIÓN CELULAR
Recogida de esplenocitos de 2 ratones para 2 fusiones con una línea celular de mieloma.
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SELECCIÓN Y CRIBADO DE HIBRIDOMAS (FASE POLICLONAL)
Selección de células híbridas (selección en medio HAT).
Cribado de sobrenadante de cultivo frente al antígeno diana (cribado mediante ELISA).
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AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE LOS MEJORES MONOCLONES
Aislamiento de monoclones mediante dilución limitante.
Expansión y cribado de los monoclones mediante ELISA o en la aplicación deseada.
Estudio de caso: producción de anticuerpo monoclonal para la detección de una proteína de la membrana celular humana
OBJETIVO DEL PROYECTO
Un cliente nos solicitó la producción de un anticuerpo monoclonal para la detección de una proteína de la membrana celular humana. El diseño del antígeno resultó especialmente retador, ya que se sabía que la proteína era difícil de expresar en células de mamífero.
Aplicación garantizada: citometría de flujo
DISEÑO Y PRODUCCIÓN DE ANTÍGENO
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Se diseñó un fragmento de proteína, que se estimaba que era el posible dominio extracelular y se podía expresar en células de mamífero.
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Se diseñó y optimizó el gen correspondiente para su expresión en células de mamífero.
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Las células de mamífero se transfectaron con un plásmido que expresaba la proteína diana acoplada a proteína verde fluorescente (GFP).
La expresión de la proteína se realizó en las líneas celulares HEK293 y CHO. La producción final se llevó a cabo en HEK.
Método de producción: proteína secretada en sobrenadante de cultivo
Rendimiento: 0,43 mg/L
Cantidad producida: 0,86 mg
Se realizó un control de calidad final mediante SDS-PAGE
INMUNIZACIÓN DE ANIMALES Y CRIBADO
Se inmunizaron 5 ratones con 4 inyecciones que contenían el antígeno proteico. En el informe completo podrá encontrar más información sobre el protocolo.
Resultados de la FC del suero de ratón ensayado frente al inmunógeno:
| Muestra ensayada | Control positivo | Ratón 3 | Ratón 4 |
|---|---|---|---|
| Suero de ratón tras la 3ª inyección | 90% | 42% | 29% |
| Suero de ratón tras la 4ª inyección | 76% | 47% |
Los resultados de los otros ratones se proporcionan en el informe completo.
El ratón 3 presentó la mejor reactividad inmunogénica contra el antígeno en la FC.
Como nuestro proyecto incluye 2 fusiones, se seleccionaron los ratones 3 y 4 para realizar la fusión.
MUESTRAS DE SOBRENADANTE TRAS LA FUSIÓN (RATÓN 4): ENSAYO ELISA
| Cribado de confirmación tras la fusión | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Identificación del clon | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 |
| Densidad óptica (OD) | 1.254 | 1.615 | 1.306 | 1.412 | 1.224 | 1.198 | 1.334 |
| Identificación del clon | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 |
| Densidad óptica (OD) | 1.251 | 1.011 | 1.394 | 1.225 | 1.636 | 0.153 | 1.647 |
| Identificación del clon | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 |
| Densidad óptica (OD) | 1.07 | 1.223 | 1.267 | 1.847 | 1.395 | 1.282 | 1.783 |
| Identificación del clon | 86 | 87 | 88 | 89 | Negativa | Positiva | |
| Densidad óptica (OD) | 1.036 | 0.983 | 1.173 | 1.116 | 0.088 | 1.731 | |
Se seleccionaron 24 clones positivos mediante ELISA.
La determinación de los mejores clones para FC se realiza directamente en la aplicación deseada.
MUESTRAS DE SOBRENADANTE TRAS LA FUSIÓN (RATÓN 4): ENSAYO DE FC
Los detalles del protocolo se proporcionan en el informe completo.
| Identificación del clon | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 |
| Resultado de la FC/% | 37.48 | 1.27 | 20.27 | 62.50 | 1.18 | 11.40 | 1.38 |
| Identificación del clon | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 |
| Resultado de la FC/% | 75.09 | 1.01 | 6.50 | 56.76 | 73.16 | 1.18 | 1.09 |
| Identificación del clon | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 |
| Resultado de la FC/% | 1.07 | 1.05 | 1.49 | 6.75 | 71.92 | 1.18 | 1.02 |
| Identificación del clon | 86 | 87 | 88 | Positiva | |||
| Resultado de la FC/% | 1.04 | 1.01 | 7.36 | 80.73 |
Se obtuvieron 11 clones positivos tras la fusión. Estos clones se subclonaron para la producción posterior de anticuerpos.
Se realizaron análisis similares mediante ELISA y FC en el ratón 3. Se obtuvieron 14 clones positivos tras la FC. Los resultados se presentan en el informe completo.
PRODUCCIÓN DE ANTICUERPO
Nuestro cliente seleccionó 30 clones para su producción. Las muestras de sobrenadante se ensayaron mediante ELISA y FC tras 2 etapas de subclonación. Los resultados se presentan en el informe completo.
CONCLUSIÓN
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Conseguimos producir una proteína difícil de expresar en cantidades suficientes como para desarrollar anticuerpos monoclonales. Para conseguirlo, se realizaron varios ensayos de expresión con varias cepas de células de mamífero.
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El protocolo de inmunización en ratones nos permitió desarrollar buenos anticuerpos contra el antígeno.
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Tras 2 fusiones, produjimos 30 hibridomas/clones que detectaban el antígeno en la citometría de flujo.
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Entregamos a nuestro cliente 30 clones y 30 anticuerpos purificados.
Haga clic en el botón para obtener el informe completo.
¿Le gustaría informarse acerca de nuestros servicios de generación de hibridomas? Lea otro estudio de caso de un anticuerpo anti-péptido.
¿Cuáles son las ventajas del desarrollo de hibridomas para la generación de anticuerpos?
La tecnología del hibridoma revolucionó el campo biotecnológico al proporcionar un método que permitía la producción de manera ilimitada y reproducible de producción de anticuerpos monoclonales. Actualmente, el desarrollo de hibridomas sigue siendo un método de referencia para la generación de anticuerpos de alta sensibilidad. Por lo tanto, la tecnología del hibridoma sigue siendo la mejor técnica para el el desarrollo de ensayos. También representa una buena alternativa a la presentación en fagos para el desarrollo de anticuerpos terapéuticos. Sin embargo, la administración de anticuerpos terapéuticos producidos mediante la tecnología del hibridoma conduce a efectos secundarios graves, ya que estos proceden de ratones. Gracias a los recientes avances en la ingeniería de anticuerpos, los componentes inmunogénicos de ratón se pueden reducir mediante un procedimiento denominado servicios de humanización de anticuerpos . Combinado con el sistema de maduración de la afinidad, este procedimiento puede resultar muy adecuado para generar anticuerpos humanizados optimizados aptos para aplicaciones terapéuticas.
