5 SISTEMAS
Con más de 15 años de dilatada experiencia en la producción de proteínas personalizada y más de 1500 proteínas producidas con éxito en 5 sistemas, ProteoGenix es líder en la producción de proteínas y anticuerpos recombinantes difíciles de expresar. LEER MÁS
Ofrecemos servicios de expresión y purificación de proteínas de pequeña a gran escala en cada una de nuestras 5 plataformas a precios competitivos, así como paquetes personalizados y más avanzados en los que ensayamos, por ejemplo, las condiciones de expresión de proteínas recombinantes en diversos sistemas, tanto en paralelo como con condiciones de expresión de proteínas más amplias en un determinado sistema. Nuestros servicios incluyen todas las etapas, desde la síntesis de genes, y la construcción de vectores de expresión hasta la producción piloto de proteínas en matraces y la expresión de proteínas a gran escala en fermentadores y biorreactores.
Nuestro cribado de las condiciones de expresión de proteínas «high throughput» está diseñado para superar los posibles retos en materia de solubilidad, pureza, funcionalidad, productividad, replegamiento o formulación. Este compromiso implica tener acceso a, y dominar, todas las tecnologías, procesos y herramientas existentes. Con una dilatada experiencia en la expresión de proteínas recombinantes de todo tipo como, por ejemplo, anticuerpos, enzimas, proteínas de membrana, citocinas, etc., y de cualquier especie, ProteoGenix ha desarrollado un conjunto integral de solucionespara abordar todos estos desafíos y proporcionar unos servicios de ingeniería de proteínas inmejorables. Pruebe los paquetes garantizados de la empresa con mayor fiabilidad en el campo de la producción de proteínas del mercado.
E. coli
EXPRESIÓN DE PROTEINAS
EN E. COLI
Expresión periplásmica, ensayos de replegamiento, paquetes
garantizados, eliminación de endotoxina, expresión en E. Coli personalizada,
producción de proteínas en bacterias.
Múltiples sistemas
PAQUETES DE EXPRESIÓN
EN MÚLTIPLES SISTEMAS
En caso de desconocimiento del sistema óptimo, realizaremos ensayos en hasta
5 sistemas y entregaremos la proteína purificada para
cada sistema
B. subtilis
PRODUCCIÓN DE PROTEINAS
EN B. SUBTILIS
Nivel de endotoxina bajo,
secreción de proteínas recombinantes,
caracterización de proteínas.
Levadura
PRODUCCIÓN DE PROTEINAS EN LEVADURAS
Saccharomyces cerevisia,
Picchia pastoris,
expresión estable.
HTP
CRIBADO DE EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS «HIGH THROUGHPUT»
Para proteínas difíciles de expresar, más de 1000
condiciones de expresión, a pequeña escala,
cribado «high throughput».
Células de insecto
PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS CÉLULAS DE INSECTO/BACULOVIRUS
Sf9, Sf21, Hi5, proteínas glicosiladas,
purificación de proteínas, producción de
producción
Mamiferos
PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS
EN CÉLULAS DE MAMÍFERO
Expresión transitoria, producción de anticuerpos
recombinantes, purificaciones mediante SEC e IEX,
bajos niveles de endotoxina, CHO, HEK293, BHK.
Líneas estables
DESARROLLO DE
LÍNEAS CELULARES ESTABLES
Sistemas exentos de derechos de la propiedad, rendimiento garantizado, desarrollo de
procesos, líneas celulares HEK293 y CHO
estables.
RAB
PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS
MONOCLONALES y RECOMBINANTES
Coste de producción bajo,
rendimiento garantizado,
variantes de anticuerpos HTP.
A gran escala
PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS A GRAN ESCALA EN FERMENTADORES/BIORREACTORES
De 1 a 4000 L en cada uno de los 5 sistemas,
servicios de purificación a gran escala,
servicios de desarrollo de procesos
Testimonio sobre producción de proteínas a medida
«Recientemente, elegí ProteoGenix para la producción de una proteína recombinante en células HEK293. La alta productividad y la fuerte actividad de la proteína obtenida, probablemente debido a su adecuada glicosilación y plegamiento, nos permitió generar unos resultados interesantes en los ensayos funcionales y superar los objetivos intermedios de nuestro proyecto de investigación. La calidad del servicio proporcionado, así como la facilidad de comunicación y la amabilidad del gestor de cuentas a cargo de nuestro proyecto, resultaron decisivas para el éxito. Me enorgullece recomendar ProteoGenix para la producción de proteínas recombinantes.»
Dr. Christian BRONNER,
doctorado y responsable científico
en el Centro Nacional de Investigación Científica (CNRS)
¿Por qué elegir ProteoGenix para la producción de su proteína recombinante?
¿Por qué elegir ProteoGenix ?
Más de 16 años de trayectoria destacada en la <strongproducción de proteínas difíciles de expresar
5 sistemas de expresión de proteínas disponibles y todas las herramientas para superar cualquier desafío en materia de expresión de proteínas.
Solución integral, desde el gen hasta la proteína, desarrollo de procesos y producción a gran escala. Consecuencias: servicio más rápido, mayor tasa de éxito, menos trabajo administrativo.
Cepas y líneas celulares exentas de derechos de la propiedad intelectual.
Producción desde muy pequeña escala hasta gran escala con 1 to 4000 L batch
Productividad de hasta 800 mg/L en expresión transitoria y 5 g/L en expresión estable.
Equipos de fermentación
Estudio de caso:
ejemplo de producción de una beta-glucosidasa en células de insecto
SERVICIO OFRECIDO
Un cliente nos solicitó la producción de una proteína beta-glucosidasa recombinante usando un sistema de expresión de baculovirus (producción en células de insecto). Nuestro cliente solicitó un paquete de células de insecto completo, que incluía ensayos de expresión y purificación a pequeña escala y posterior producción y purificación piloto de 1 L. Conseguimos un rendimiento de 370 mg/L y, tras la expresión a pequeña escala, le entregamos 60 mg. La producción piloto de 1 L resultó no ser útil, por lo que no emitimos cargo alguno por ella a nuestro cliente. El servicio ofrecido incluyó:
BIOLOGÍA MOLECULAR
El ADNc que codifica para la proteína beta-glucosidasa se sintetizó químicamente tras la optimización de secuencias para la expresión en células de insecto. A continuación, se subclonó en un vector de expresión de nuestra propiedad. Para su purificación posterior, se añadió una secuencia que codificaba para una cola de polihistidina (6His tag).
ENSAYOS DE EXPRESIÓN
GENERACIÓN DE SOLUCIÓN MADRE DE VIRUS P1
Figura 1: análisis de la expresión en células de insecto durante la generación de P1.
Izquierda Tinción con azul de Coomassie. Derecha. WB con anticuerpo anti-His (sustrato ECL) «-». Cultivo de control
sin transfectar. 1 y 2 son transfecciones con 2 clones de bácmido diferentes.
Conclusión sobre la etapa de generación de virus P1
Mediante SDS-PAGE, se observó una banda de proteína compatible con el peso molecular de la proteína beta-glucosidasa en los extractos de proteína nativa. Este resultado se confirmó mediante Western Blot (Figura 1, flechas verdes). El clon de bácmido recombinante n.º 1 se utilizó para los ensayos de expresión.
ENSAYOS DE AMPLIFICACIÓN Y EXPRESIÓN DEL VIRUS
Figura 2. Ensayos de expresión de la proteína con solución madre P2.
Tinción con azul de Coomassie. Izquierda Tipo de célula 1.Derecha. Tipo de célula 2 «-». Cultivo de control negativo
Conclusión de los ensayos de expresión
Los ensayos de expresión con P2 confirman que la proteína deseada está presente en los extractos de proteína nativa a una concentración alta (Figura 2, flechas verdes). Condiciones óptimas para la expresión de la proteína nativa: Figura 2, flecha roja = límite de identificación (LOI)
ENSAYOS DE PURIFICACIÓN
Figura 3: ensayo de purificación de la proteína a pequeña escala. Tinción con azul de Coomassie.
Izquierda Perfil de purificación. Derecha. Control de calidad final del pool de purificación
IN. Entrada. FT. Volumen de elución. W1-W3. Etapas de lavado. E1-E9. Fracciones eluidas.
Conclusión de los ensayos de purificación a pequeña escala
La proteína beta-glucosidasa recombinante se puede producir y purificar en condiciones nativas. La proteína tiene una pureza ≥ 95 % y el rendimiento de producción/purificación es de aproximadamente 370 mg/L. El sistema de expresión de baculovirus resultó ser una elección perfecta para esta proteína.
¿Qué sistema elegir para la producción de su proteína recombinante?
COMPARATIVA ENTRE LOS 5 SISTEMAS DE EXPRESIÓN OFRECIDOS POR PROTEOGENIX -
SISTEMA DE EXPRESIÓN EN CÉLULAS PROCARIOTAS FRENTE A EUCARIOTAS.
La tabla siguiente da una idea de las ventajas de cada uno de los cinco sistemas heterólogos de expresión de proteínas diferentes para la producción de proteínas recombinantes desde un punto de vista general. Obviamente, las características pueden variar de una proteína a otra. Cuantas más estrellas hay, mejor es el sistema.
Sistema de expresión |
Tiempo | Coste | Modificación postraduccional (PTM) | Niveles de endotoxina bajos | Sencillez de escalado del proceso | Secreción |
E. coli | **** | **** | * | * | *** | * |
B. subtilis | *** | *** | * | **** | *** | ** |
Levaduras (P. pastoris, S. cerevisiae) |
* | *** | ** | **** | ** | ** |
Baculovirus/células de insecto Células de insecto |
* | ** | *** | **** | * | *** |
Células de mamífero | *** | * | **** | **** | ** | **** |
La tabla siguiente da una idea de las ventajas de cada uno de los cinco sistemas heterólogos de expresión de proteínas diferentes para la producción de proteínas recombinantes desde un punto de vista general. Obviamente, las características pueden variar de una proteína a otra. Cuantas más estrellas hay, mejor es el sistema.
Sistema de expresión |
Tiempo | Coste | Modificación postraduccional (PTM) | Niveles de endotoxina bajos | Sencillez de escalado del proceso | Secreción |
E. coli | **** | **** | * | * | *** | * |
B. subtilis | *** | *** | * | **** | *** | ** |
Levaduras (P. pastoris, S. cerevisiae) |
* | *** | ** | **** | ** | ** |
Baculovirus/células de insecto Células de insecto |
* | ** | *** | **** | * | *** |
Células de mamífero | *** | * | **** | **** | ** | **** |
Sistema de expresión | Plazo | Precio |
E. coli | 3-6 semanas | Precios a partir de 1 650€ |
B. subtilis | 4-6 semanas | |
Levaduras (P. pastoris, S. cerevisiae) |
6-7 semanas | |
Baculovirus/células de insecto Células de insecto |
8-11 semanas | |
Células de mamífero | 7-9 semanas |
PLAZO Y PRECIO
Sistema de expresión | Plazo | Precio |
E. coli | 3-6 semanas | Precios a partir de 1 650€ |
B. subtilis | 4-6 semanas | |
Levaduras (P. pastoris, S. cerevisiae) |
6-7 semanas | |
Baculovirus/células de insecto Células de insecto |
8-11 semanas | |
Células de mamífero | 7-9 semanas |
Contenido del servicio
Evaluación de la expresión y purificación a pequeña escala con ensayo de múltiples condiciones de expresión.
Producción y purificación de 1 L.
PAQUETES DE MÚLTIPLES SISTEMAS DE EXPRESIÓN NO EXHAUSTIVOS
Código del paquete | Tipo | Sistemas | Precio |
ATX-PTR4S01 | 4 sistemas Paquete de expresión |
E. coli/levaduras/baculovirus/ Células de mamífero |
Precios a partir de 2 450€ |
ATX-PTR3S05 | 3 sistemas Paquete de expresión |
B. subtilis/levaduras/baculovirus | |
ATX-PTR2S02 | 2 sistemas Paquete de expresión |
E. coli/baculovirus |
El sistema de purificación de proteína recombinante utilizado más habitualmente es E. coli. De hecho, es el sistema más sencillo, rápido y rentable para la expresión personalizada de una proteína. Los cultivos bacterianos crecen mucho más rápido que los de células de insecto, células de mamífero o levaduras. Por lo tanto, es más sencillo y más rápido ensayar en ellos un gran número de condiciones diferentes. También se dispone de más soluciones a la hora de ensayar y, por tanto, se puede conseguir una tasa de éxito más alta en la expresión de proteínas recombinantes. Los rendimientos de la expresión transitoria de proteínas recombinantes también son generalmente mucho más altos que en levaduras, baculovirus/células de insecto o células de mamífero. Con frecuencia, la producción de proteínas recombinantes en E. coli (Escherichia Coli) es la solución propuesta por ProteoGenix cuando la aplicación final requiere cantidades de proteína grandes, por ejemplo, cristalografía y resonancia magnética nuclear (NMR), y no se necesitan modificaciones postraduccionales (PTM). Sin embargo, las principales desventajas del sistema de expresión E. Coli son las grandes cantidades de endotoxina que quedan en la muestra final y la falta de modificaciones postraduccionales. Es posible eliminar la endotoxina, pero no es conveniente a nivel industrial y, por otra parte, no se puede hacer mucho para resolver los problemas de falta de PTM, únicamente utilizar un sistema de expresión diferente. Con estos cinco sistemas, podemos cumplir los requisitos de una gran cantidad de solicitudes de síntesis de proteínas y, por consiguiente, tenemos una tasa de éxito superior al 95 % en la síntesis de proteínas recombinantes. Trabajamos continuamente para integrar nuevos sistemas y soluciones que nos permitan ofrecer el mejor servicio posible a todos los clientes que necesiten contar con nuestros servicios de producción de proteínas recombinantes con estándares de calidad altos.
Si tiene alguna duda acerca de qué sistema de expresión elegir, como empresa líder en la producción de proteínas, le guiaremos en todo el proceso, desde el gen hasta la proteína, para definir la estrategia óptima en función de su plazo, su presupuesto y las características de la proteína necesarias.
Equipo, capacidad, organización
Nuestros laboratorios de producción de proteínas recombinantes están organizados en diversas plataformas y laboratorios para garantizar un servicio de óptima calidad, un producto de máxima pureza, un riesgo mínimo de contaminación y la mejor organización posible, con el fin de ofrecer un servicio rápido y seguro.
Contamos con una plataforma para cada uno de nuestros cinco sistemas de expresión y con un laboratorio de control de calidad independiente,… Cada plataforma está gestionada por jefes de equipo expertos que garantizan el suministro de proteínas que cumplen a la perfección con las especificaciones iniciales del cliente. Tras haber producido más de 1500 proteínas, y gracias a nuestros equipos especializados en cada sistema, nuestra experiencia en cada uno de ellos no tienen parangón.
Aplicaciones de la expresión
de proteínas recombinantes personalizada
Las proteínas recombinantes de ProteoGenix se utilizan en un amplio espectro de aplicaciones y, entre nuestros clientes en el campo de las ciencias biológicas, contamos con empresas farmacéuticas, de diagnóstico, biotecnológicas, agroalimentarias, de tecnología agrícola, de energías alternativas, empresas cosméticas, laboratorios de investigación nacionales, etc.
A continuación, presentamos un listado de algunas aplicaciones: