Services de phage display pour la découverte d’anticorps

La génération d’une banque d’anticorps est une première étape essentielle dans tous les projets de phage display. Le processus englobe la récupération du répertoire d’anticorps naïfs ou immuns d’espèces hôtes spécifiques en récoltant leurs lymphocytes B (cellules B) ou en isolant les PBMC (cellules mononucléaires du sang périphérique) par centrifugation en gradient de densité d’échantillons de sang. La diversité de ces répertoires est ensuite saisie par extraction de l’ARNm, synthèse de l’ADNc et amplification par PCR des gènes codant pour les anticorps.

Les banques naïves sont appréciées pour leur polyvalence (adaptabilité à différents projets/antigènes), tandis que les banques immunes sont considérées comme nécessitant plus de travail et sont réservées aux projets particulièrement difficiles visant à augmenter l’affinité et la sélectivité des anticorps.

Vous êtes intéressé par notre service de screening de banques naïves ou par la construction d’une banque immune ? N’hésitez pas à contacter notre expert dédié.

ProteoGenix a développé un large choix de banques propriétaires de phage display que vous pouvez adapter à tous vos projets. Notre objectif est de répondre à toutes vos exigences et de toujours repousser les limites de l’innovation en créant de nouvelles et meilleures banques phage display. Que vous ayez besoin d’un anticorps entièrement humain ou d’un nanobody pour des applications thérapeutiques ou d’un anticorps de lapin de haute affinité pour des applications de diagnostic, nos banques vous aideront à relever vos défis les plus difficiles. N’hésitez pas à contacter nos experts pour plus d’informations.

« Les trois anticorps que vous avez livrés ont été reformatés en IgG et ont bien fonctionné. Il est intéressant de noter que deux d’entre eux étaient des liants d1 et que le dernier était un liant d1/d2 lorsque nous les avons cartographiés ici. C’étaient de bons anticorps bloquant la « protéine X ». Mais aucun n’était un bloqueur de « protéine Y ». Ils s’expriment raisonnablement bien. Dans l’ensemble, nous sommes assez satisfaits d’eux.

« ProteoGenix a été généreux et sincère dans son soutien à un laboratoire universitaire comme le nôtre. Ils ont pu identifier plusieurs séquences d’anticorps via le phage display contre un antigène protéique et ils ont criblé deux fois plus de phages que prévu initialement pour nous aider à réussir notre projet. L’équipe de ProteoGenix a été réactive et diligente dans ses réponses et services. »

« Nous développons une nouvelle immunothérapie et avons besoin d’un anticorps monoclonal très puissant. Actuellement, le développement d’un nouvel anticorps nécessite un processus d’humanisation long et coûteux. Nous avons donc décidé de rechercher des liants dans une banque d’anticorps humains via un criblage par phage display au lieu d’humaniser un anticorps murin. C’est ce que Proteogenix nous a proposé. Nous avons fourni notre antigène cible purifié et, en un mois seulement, plusieurs liants de haute affinité ont été obtenus. Nous avons pu rapidement cloner et produire un anticorps monoclonal à partir des séquences fournies. Ce qui aurait dû prendre 6 à 8 mois a été réalisé en 2 mois pour une fraction du coût et pour une qualité équivalente. »

La technologie du phage display englobe la détermination des partenaires d’interaction d’une protéine spécifique (protéine-protéine, protéine-ADN ou protéine-peptide). Ces interactions peuvent ensuite être utilisées comme « appât » pour capturer des phages affichant des peptides, des protéines ou des anticorps codés dans des banques ADN à haute diversité. Grâce à ces interactions, il devient possible de déterminer la fonction d’un peptide ou d’une protéine spécifique.

Cycle d’affichage de phages : banque phage display, panning/biopanning et validation par ELISA

Le phage display utilise généralement des phages filamenteux tels que le phage M13 d’Escherichia coli. Cette méthode s’est avérée être un moyen puissant d’interroger des banques contenant des milliards de protéines ou de peptides différents.

L’application de la technique du phage display sur de grandes banques d’anticorps a permis d’isoler avec succès des anticorps monoclonaux hautement sélectifs et spécifiques.

L’utilisation de banques composées de milliards d’anticorps affichés sur des phages offre une alternative très précieuse et efficace aux méthodes traditionnelles de génération d’anticorps en permettant la sélection rapide des candidats les plus pertinents pour votre recherche.

Toutes les banques anticorps de ProteoGenix sont fabriquées à l’aide du phage display filamenteux M13, un virus infectant la bactérie E. coli. M13 est un phage lysogène, composé d’un ADN circulaire et monocaténaire enfermé dans un tube mince et flexible recouvert d’environ 2700 copies de la protéine pVIII, la protéine d’enveloppe majeure, et d’environ 5 copies de la pIII, la protéine d’enveloppe mineure, présentes aux extrémités du tube.

L’infection par les plasmides M13 n’est pas létale pour les bactéries et ils sont utilisés pour de nombreux processus de recombinaison de l’ADN. Les anticorps sont généralement présentés sous forme de fragments tels que les fragments variables à chaîne unique (scFv), les fragments de liaison à l’antigène (Fab) ou les fragments d’anticorps à chaîne lourde variable (VHH ou nanobodies).

Ces fragments sont généralement fusionnés à la protéine pIII et clonés dans un vecteur phagemid, comprenant une version simplifiée du phage M13 contenant uniquement la protéine de fusion pIII-anticorps, une origine de réplication et un marqueur de sélection (par exemple, un gène de résistance aux anticorps).

Le vecteur phagemid est utilisé en conjugaison avec un phage helper qui, à son tour, contient tous les éléments essentiels du phage M13, à l’exception d’une origine de réplication légèrement défectueuse et de l’absence de fragments d’anticorps. La co-transformation de ces deux éléments dans E. coli entraîne l’expression de particules phagiques hybrides présentant généralement une seule protéine de fusion pIII-anticorps à côté des protéines pIII natives (essentielles à l’infection).

L’abondance réduite des anticorps présentés par particule de phage garantit que seuls les liants ayant la plus grande affinité sont sélectionnés au cours du processus de biopanning.