Anticorps polyclonaux, Phage Display, Hybridomes? Essayez notre quiz et obtenez la réponse appropriée
Vous êtes engagé dans le développement d’immunothérapies ou d’immunodiagnostics ? Obtenez des anticorps sur mesure aux propriétés optimales, avec une sensibilité, une affinité et une stabilité exceptionnelles. Forts de plus de 25 ans d’expérience et de plus de 6 000 projets réussis, nous nous efforçons d’associer vos projets les plus innovants et les plus ambitieux à nos experts les plus qualifiés et à nos solutions de pointe. Que vous développiez des anticorps monoclonaux ou polyclonaux destinés à être utilisés en thérapie, en recherche ou en diagnostic, nos vastes capacités et nos équipements de pointe sont conçus pour vous permettre de faire des découvertes révolutionnaires.
Nos services de production d'anticorps
Production d'anticorps polyclonaux
Si vous cherchez à augmenter la sensibilité et à élargir la spécificité épitopique de vos essais immunologiques, notre plateforme de production d’anticorps polyclonaux est votre meilleur choix :
- Grande diversité d’espèces (lapin, souris, chèvre, lama, alpaga, poule, etc.)
- Stratégies d’immunisation optimisées pour protéines, peptides, et antigènes ADN
- Stratégies de purification et de conjugaison sur mesure pour résultats optimaux
Production d'anticorps monoclonaux:
Si vous cherchez à produire des anticorps hautement spécifiques ou à améliorer leurs propriétés, nos services de production d’anticorps monoclonaux sont votre meilleur choix :
- Technologies de pointe pour la découverte d’anticorps (hybridome et phage display)
- Une vaste panoplie de méthodes pour concevoir vos anticorps les plus prometteurs.
- Accès à des systèmes hautement productifs pour la production rapide d’anticorps recombinants
Vous n’êtes pas sûrs du procédé de production qui soit le mieux adapté à vos besoins? Obtenez une réponse claire et personnalisée en moins de 2 minutes grâce à notre quiz en ligne:
Notre accès aux technologies de pointe et notre grande flexibilité nous permettent de créer des solutions uniques adaptées à vos objectifs et besoins spécifiques. Toutes nos ressources et notre expertise sont mises à votre disposition pour vous permettre de réaliser vos découvertes révolutionnaires en matière de développement d’anticorps.
Découvrez comment ProteoGenix peut vous aider à donner vie à vos projets.
Pourquoi choisir les services de ProteoGenix
pour la production d'anticorps personnalisés ?
Solutions sur-mesure
Prenez des décisions éclairées sur vos projets de développement d’anticorps en accédant à notre vaste portefeuille d’équipements de pointe et à notre expertise étendue.
Vaste choix d'antigènes
Il y a toujours plus d’une façon d’atteindre le même objectif. Pour vous assurer de prendre la meilleure voie, notre équipe expérimentée est prête à vous proposer des solutions adaptées à vos besoins spécifiques.
Format des anticorps et diversité des espèces
Produire vos anticorps dans n’importe quelle espèce (y compris l’homme) et n’importe quel format (scFv, Fab, VHH, pleine longueur ou protéines de fusion d’anticorps).
Les meilleures garanties du marché
Votre satisfaction est notre priorité absolue et nous appliquons ce principe dans tout ce que nous faisons. Comme résultats, nous offrons les meilleures garanties du marché (rendement, réactivité…)
Approche holistique du développement d'anticorps
Tous vos projets commencent avec l’objectif final en tête. Que vous développiez des anticorps pour la thérapie, la recherche ou le diagnostic, nous mettons toutes nos vastes capacités à votre disposition.
Des gestionnaires de projets de niveau PhD dévoués
Nous mettons à votre disposition des gestionnaires de projets hautement qualifiés qui vous guident tout au long de votre processus de décision.
Un engagement fort en faveur du bien-être des animaux
ProteoGenix applique les normes éthiques les plus élevées et s’engage à respecter l’utilisation éthique de la science animale.
Notre procédé de production d'anticorps
En tant que leader mondial de la production d’anticorps, ProteoGenix s’efforce non seulement de fournir les meilleurs services de sa catégorie, mais aussi une large gamme de solutions pour s’adapter soigneusement aux spécifications de chaque projet. Notre équipe passionnée est également prête à partager sa longue expérience avec ses clients. En conséquence, nous sommes en train de développer un nouveau formulaire interactif pour vous guider dans la définition de la stratégie de production d’anticorps la plus pertinente pour votre projet.
Conception et production d’antigènes
Grande diversité d’antigènes :
Protéines, peptides, ADN, petites molécules, cellules entières
Génération d’anticorps
3 technologies de découverte :
- Génération d’hybridomes
- phage display anticorps naïfs ( banques premium adaptées aux applications thérapeutiques et analytiques)
- Immuno-anticorps phage display (protocoles optimisés de construction de banque )
Caractérisation & Validation d’anticorps
Des capacités d’analyse étendues pour un développement optimal :
Séquençage des anticorps, pureté, stabilité, affinité, agrégation, profil de glycosylation et validation dans l’application cible (recherche et diagnostic) ou en utilisant la conformation native de votre antigène (développement thérapeutique).
Ingéniérie d’anticorps
Stratégies diversifiées pour l’optimisation des pistes d’anticorps :
Humanisation d’anticorps, maturation par affinité, développement d’anticorps bispécifiques, reformatage d’anticorps, conjugaison anticorps-médicament, conjugués d’anticorps pour le développement d’essais immunologiques
Production d’anticorps
Technologies de production d’anticorps optimisées :
- Petite et moyenne échelle : production transitoire dans des cellules de mammifères (XtenCHO™, CHO, HEK)
- À grande échelle : développement de lignées cellulaires stables dans les lignées CHO ou HEK
Production d'anticorps polyclonaux vs.
Production d'anticorps monoclonaux
Les anticorps sont appréciés pour leur capacité à se lier à des cibles spécifiques et peuvent donc être utilisés pour détecter, quantifier, délivrer des cargaisons (par exemple, de petits médicaments), bloquer ou activer des interactions protéiques spécifiques. Ces propriétés les rendent inestimables pour un large éventail d’applications.
Le premier choix, le plus important, consiste à choisir entre les anticorps polyclonaux et monoclonaux . La sélection de la clonalité d’anticorps appropriée pour vos expériences est un choix vital et plusieurs paramètres doivent être pris en compte.
Vous trouverez un aperçu des avantages et des inconvénients de chaque solution dans le tableau ci-dessous :
| Anticorps monoclonaux | Anticorps polyclonaux | |
|---|---|---|
| Avantages | Meilleure spécificité et moins de bruit de fond quantité illimitée d’anticorps Standardisation + répétabilité Possibilité de séquençage et d’ingéniérie |
Potentiellement meilleure immunogénicité + sensibilité aux anticorps Moins sensible aux variations de conformation de l’antigène Production rapide et peu coûteuse |
| Inconvénients | Potentiellement moins d’immunogénicité + sensibilité aux anticorps Longue et coûteuse à produire |
Risque de fond dû aux réactions croisées Quantité limitée d’anticorps Variabilité des lots |
| Espèces disponibles | Souris, rat, lama, alpaga, lapin, humain | souris, rat, lapin, poule, cochon d’Inde, mouton, chèvre, alpaga, lama |
Anticorps polyclonaux sont un mélange d’anticorps monoclonaux capable de lier différents épitopes du même antigène. Le processus de production d’anticorps polyclonaux commence par l’immunisation des animaux hôtes, l’évaluation de leurs réponses immunitaires et la collecte du sérum enrichi en anticorps lorsque les titres d’anticorps souhaités sont atteints.
Le sérum est utilisable tel quel ou peut être purifié davantage. Différentes techniques de purification peuvent être utilisées en fonction de l’application finale. Par exemple, la plupart des anticorps polyclonaux sont purifiés à l’aide de protéines de liaison aux immunoglobulines (A, G ou L). Cependant, en utilisant cette méthode, de nombreux anticorps non spécifiques sont encore présents dans le lot de production final. Pour les applications nécessitant un degré de spécificité plus élevé, le sérum doit être purifié par des méthodes spécifiques aux antigènes.
Globalement, la production d’anticorps polyclonaux est moins complexe que celle d’anticorps monoclonaux. Il s’agit donc de la meilleure solution pour le développement rapide et peu coûteux d’anticorps. Ces réactifs présentent plusieurs avantages en raison de leurs propriétés de liaison multi-épitopes :
- Haute sensibilité – solution parfaite pour la détection de protéines à faible niveau d’expression
- Moins sensible aux changements de conformation – la moindre sensibilité aux variations de conformation de l’antigène rend les anticorps polyclonaux utiles pour la détection des protéines dénaturées.
Toutefois, ces réactifs sont sujets à des variations d’un lot à l’autre en raison des procédés de production d’anticorps utilisés pour les générer. De plus, leur capacité de liaison multi-épitope peut entraîner une augmentation de la réactivité croisée, ce qui peut conduire à des résultats non concluants. Plusieurs méthodes permettent de limiter, voire de surmonter, le problème de la réactivité croisée :
- Immunisation avec un ou plusieurs peptides immunogènes limitant ainsi la gamme des épitopes liés par la préparation d’anticorps polyclonaux.
- Réalisation d’une purification spécifique d’épitope (ou multi-épitope) pour limiter les régions de l’antigène reconnues par les anticorps polyclonaux.
Les anticorps polyclonaux sont appréciés pour leur sensibilité et leur large réactivité. Cependant, étant donné leur variabilité d’un lot à l’autre, ils ne conviennent pas aux essais quantitatifs ou aux essais nécessitant une grande spécificité.
Les anticorps monoclonaux sont produits par des cellules immunitaires identiques qui sont des clones d’une seule cellule mère. Ainsi, les anticorps monoclonaux reconnaissent spécifiquement un épitope d’un antigène.
Contrairement aux molécules polyclonales, les anticorps monoclonaux peuvent être générés par diverses méthodes, en utilisant des approches dépendantes ou indépendantes de l’immunisation. Les deux méthodes les plus importantes de production d’anticorps monoclonaux sont les suivantes :
- Développement d’hybridomes ( in vivo )
- Phage display d’anticorps ( in vitro )
Lorsqu’il est généré in vivo, le processus de génération d’anticorps monoclonaux personnalisés est très similaire au processus de production d’anticorps polyclonaux. Mais une fois qu’une réponse immunitaire efficace est mise en place, les plasmocytes sont isolés du sérum et fusionnés avec des lignées cellulaires de myélome pour produire des hybridomes – des plasmocytes immortalisés.
Malgré la complexité de ce processus, une fois développés, les hybridomes peuvent produire une quantité « infinie » d’anticorps. De plus, les lignées cellulaires d’hybridomes peuvent être séquencées et rapidement adaptées à la production recombinante – ce qui garantirait la production durable et à grande échelle de ces anticorps.
Le procédé de génération in vitro d’anticorps (phage display) est souvent favorisé pour les applications thérapeutiques. Lors du criblage de vastes banques d’anticorps naïfs ou immunisés, la probabilité de trouver des anticorps capables de se lier à de nouvelles cibles est immense.
Dans l’ensemble, les anticorps monoclonaux peuvent présenter plusieurs avantages par rapport aux anticorps polyclonaux :
- Haute spécificité : capacité à reconnaître un seul épitope d’un antigène et à détecter des modifications post-traductionnelles spécifiques ou des mutations mononucléotidiques.
- Haute sélectivité : les anticorps monoclonaux ont généralement une haute sélectivité (faible réactivité croisée) et présentent donc moins de risques de liaison hors cible.
- Cohérence élevée d’un lot à l’autre : permet la normalisation des essais à base d’anticorps et la quantification des cibles.
- Évolutivité : possibilité de développer des applications à grande échelle (développement d’anticorps thérapeutiques ou fabrication de diagnostics in vitro ou de dispositifs médicaux).
En raison de leur haute spécificité, les anticorps monoclonaux sont plus sensibles aux changements de conformation de l’épitope. Cette propriété les rend moins efficaces dans les applications nécessitant une plus grande sensibilité (cibles peu abondantes) mais elle les rend également avantageuses pour les applications nécessitant une grande sélectivité telles que les diagnostics différentiels (détection de mutations ou de modifications post-traductionnelles) ou le traitement de maladies complexes.
Pourquoi une conception adéquate de l'antigène est-elle si cruciale
la production d'anticorps de haute qualité ?
Forts de notre grande expérience dans le développement d’anticorps, nous savons que la conception d’un antigène peut faire ou défaire un projet. Pour maximiser vos chances de réussite, nous tenons toujours compte de la conformation native de votre antigène et de l’application finale prévue de votre anticorps.
C’est pourquoi nous investissons continuellement dans la diversification de la conception des antigènes :
- Protéines : ces antigènes classiques restent l’approche la plus importante pour la génération d’anticorps. L’utilisation de protéines recombinantes entières garantit que vos anticorps reconnaissent un seul antigène (haute spécificité). Cependant, cette méthode augmente également les risques de générer des anticorps peu sélectifs et enclins à se lier à des domaines conservés partagés par de nombreuses protéines différentes. Chez ProteoGenix, nous pouvons produire des protéines dans une variété de systèmes recombinants, notamment :
Produisez vos antigènes protéiques complexes dans des lignées cellulaires CHO ou HEK – les meilleurs hôtes mammaliens du marché.
En savoir plus à propos de nos protocoles de production protéique dans Saccharomyces cerevisiae ou Pichia pastoris
Produisez vos antigènes protéiques dans nos baculovirus/cellules d’insecte pour un meilleur repliement des protéines.
- ADN : L’immunisation par ADN est couramment utilisée pour les protéines difficiles à exprimer ou les protéines transmembranaires. Le principal avantage de l’immunisation par l’ADN reste la possibilité d’exprimer l’antigène dans sa conformation native.
- Peptides : l’utilisation de peptides comme antigène favorise la production d’anticorps présentant une faible réactivité croisée et une grande spécificité. Cependant, ils sont souvent moins immunogènes à cause de leur petites tailles. Concevoir un peptide-antigène pour la production d’anticorps demande de prendre en considération certains facteurs:
- Eviter les peptides contenant des séquences très conservées parmi de nombreuses familles protéiques
- Favoriser les séquences flexibles et exposées aux solvants (pas de structures secondaires telles que les α-hélices ou les β-sheets) qui resteront accessibles tout au long du processus de génération d’anticorps.
- Favoriser les séquences hydrophiles qui sont plus susceptibles d’être exposées aux solvants que les structures hydrophobes, généralement enfouies dans la structure. Ils sont également plus facile à solubiliser avant injection.
- Favoriser les peptides de 10 à 20 acides aminés (taille optimale) qui offrent le meilleur équilibre entre immunogénicité, solubilité, spécificité et réactivité croisée.
- Autres antigènes: cellules complètes, petites molécules, etc.
Notre expérience de 6 000 anticorps produits (monoclonaux ou polyclonaux) vous permet de prendre des décisions éclairées concernant la conception des antigènes. N’hésitez pas à décrire votre projet à nos chargés d’affaires, docteurs, qui se feront un plaisir d’apporter une réelle valeur ajoutée à votre stratégie de production d’anticorps.
Comment sont produits les anticorps?
Comment cela peut influencer votre choix de technologie
de production d'anticorps?
Comprendre les étapes basiques de la production d’anticorps in vivo permet d’avoir une meilleure vue d’ensemble des avantages de méthodes de production d’anticorps, à la fois in vivo et in vitro . En outre, les avantages particuliers de chaque méthode peuvent dicter le meilleur choix pour vos projets.
Laproduction d’anticorps in vivo se produit lorsque le système immunitaire rencontre une substance étrangère, l’immunogène. Une fois qu’un antigène se lie à la surface d’un lymphocyte B, ces cellules peuvent être activées de deux manières différentes : les polysaccharides, les lipopolysaccharides et d’autres antigènes non protéiques activent directement les lymphocytes B de manière indépendante des cellules T (le signal d’activation provient d’une autre source que les cellules T, comme les facteurs du système du complément), tandis que les antigènes protéiques les activent de manière dépendante des cellules T en plusieurs étapes :
- Reconnaissance d’antigènes et internalisation par les lymphocytes B
- Presentation d’antigène à une cellule Th -helper-spécifique du même antigène
- Interaction cellule T auxiliaire – antigène (reconnaissance liée)
Une fois activés par la reconnaissance liée, les lymphocytes T auxiliaires de type 2 activent les lymphocytes B grâce à la libération de cytokines entraînant la prolifération de cellules filles. Ce processus culmine dans l’hypermutation somatique qui entraîne des mutations aléatoires des chaînes lourdes et légères variables. Cette étape est suivie d’une autre étape de sélection au cours de laquelle seule la mutation positive (conduisant à une affinité accrue contre l’antigène) sera conservée. Ainsi, l’hypermutation somatique permet la génération d’anticorps et de cellules mémoire ayant une affinité plus élevée contre l’antigène.
Une sécrétion supplémentaire de cytokines entraîne la différenciation des cellules B activées en cellules B à mémoire et en plasmocytes, chacun ayant une fonction définie :
- Lescellules B à mémoire ne sont pas sécrétrices et font office de mémoire immunogène, ce qui permet une réponse rapide en cas d’exposition ultérieure au même antigène.
- Les plasmocytes sécrètent des IgM qui subissent ensuite une commutation isotypique pour produire des anticorps IgG, IgA et IgE.
La stimulation des plasmocytes par les cytokines libérées par les lymphocytes T auxiliaires de type 2 permet de passer de la production d’IgM à une autre classe comme les IgG, les IgA ou les IgE. Ce changement n’affecte pas l’affinité des anticorps pour l’antigène car il consiste uniquement en une modification génétique, une modification de la région constante (réalisée par réarrangement génétique).
La libération des anticorps dans la circulation sanguine ne se produit qu’une fois que des anticorps présentant des affinités suffisantes sont générés. Cette réponse anticorps a lieu en deux temps:
- Phase primaire: la réponse primaire est caractérisée par une phase de latence d’environ 10 jours. Cette phase comprend toutes les étapes, de la fixation de l’antigène aux cellules B naïves à la prolifération clonale. La fin de cette période est caractérisée par une augmentation des taux d’IgM dans le sérum avec un maximum d’IgM à J14. Ensuite, une diminution des taux d’IgM est observée et est corrélée à une augmentation des taux d’IgG. Cette phase comprend également la génération de cellules mémoire qui seront activées en cas de nouvelle exposition.
- Réponse secondaire : pendant la réponse secondaire, la phase de latence ne dure pas plus de quelques jours. Ensuite, cette réponse est caractérisée par des niveaux élevés de production d’IgG de haute affinité.
Adapté de : Abbas et al. Immunologie cellulaire et moléculaire. Elsevier.
Dans le contexte de la production d’anticorps personnalisés, l’induction d’une réponse immunitaire peut être obtenue par l’immunisation avec diverses substances telles que de grosses molécules, des virus ou des bactéries. Cependant, certaines substances n’induisent pas de réponse immunitaire (ou seulement une faible réponse immunitaire), principalement en raison de leur petite taille.
Pour cette raison, la conception d’antigène reste une étape majeure dans la production d’un anticorps personnalisé. Si l’antigène lui-même peut être modifié pour susciter une réponse immunitaire, il est également possible de le co-administrer avec un adjuvant pour renforcer son immunogénicité. Si les adjuvants chimiques sont insuffisants, la production d’anticorps in vivo risque de ne pas être adaptée à votre projet et des solutions in vitro doivent être envisagées. Dans ce cas, le criblage de banque naïve avec anticorps phage display reste la meilleure solution.
Vous n’êtes pas sûr de la meilleure technologie de génération d’anticorps à utiliser pour votre projet ? Contactez nos experts en production d’anticorps qui élaboreront une solution personnalisée adaptée à vos besoins, votre budget et votre temps.
