Commencez à créer des diagnostics de nouvelle génération à base d’anticorps en utilisant notre approche sans risque de la production d’hybridomes. Notre processus de production d’hybridomes pour les applications de diagnostic garantit que vos anticorps offrent les meilleures performances, indépendamment des types d’échantillons ou des conditions de test. Avec dix packages garantis par application et un accès rapide à des services complémentaires tels que la conjugaison d’anticorps, la mise au point de tests ELISA personnalisés et la production de recombinants, nous nous efforçons de faire en sorte que même vos projets les plus ambitieux atteignent le marché dans les meilleurs délais.
Pourquoi choisir le service de production d'hybridomes de ProteoGenix pour le développement de vos anticorps diagnostic ?
Les meilleures garanties
Testez votre anticorps de diagnostic avec vos échantillons et des conditions de test spécifiques : ne payez que si vous êtes satisfait ! Les meilleures garanties du marché!
Criblage dans l'application cible
Cytométrie en flux, Sandwich ELISA, IHC/ICC, IF, IP, WB… Votre anticorps est garanti dans l’application de votre choix.
Réduction des délais de commercialisation
Services intégrés en aval pour accélérer vos applications de diagnostic, comme le développement d’ELISA personnalisés, la conjugaison d’anticorps (biotine, HRP, fluorochromes…) et l’expression recombinante.
Taux de réussite élevé
Notre taux de réussite est supérieur à 98 % sur plus de 300 anticorps monoclonaux développés !
Normes éthiques les plus élevées
ProteoGenix applique les normes éthiques les plus élevées et s’engage à respecter l’utilisation éthique des animaux dans la science.
Diversité des méthodes d'immunisation
Immunisation par protéine, peptide, ADN… Nous réalisons tous types de stratégies d’immunisation !
Notre processus de génération d'hybridomes
pour applications diagnostic
-
DESIGN D’ANTIGENE
Définition de la stratégie d’immunisation la plus pertinente.
Conception d’antigènes : synthèse de peptides, synthèse de gènes et production de protéines dans 2 systèmes ou ADN Immunisation.
-
IMMUNISATION
Immunisation de 5 souris avec notre protocole propriétaire optimisé
-
FUSION CELLULAIRE
Prélèvement des splénocytes de 2 souris pour 2 fusions avec une lignée cellulaire de myélome
-
SÉLECTION ET CRIBLAGE DES HYBRIDOMES (STADE POLYCLONAL)
Sélection de cellules hybrides (Sélection HAT)
Dépistage du surnageant de culture par rapport à l’antigène cible (dépistage ELISA)
-
ISOLEMENT ET SÉLECTION DES MEILLEURS MONOCLONES
Isolement des monoclonaux par dilution limitante.
Expansion et criblage des monoclones par ELISA ou en application ciblée.
-
DEVELOPPEMENT POUR APPLICATIONS DIAGNOSTIC
Validation de l’anticorps dans une ou plusieurs applications cibles
Les applications garanties dans nos packs
en un coup d'œil
| Nom du pack | Code | Synthèse des gènes et production d’antigènes | Immunisation, fusion, dépistage ELISA et sous-clonage | Filtrage dans l’application | Production Ac purifié | Conjugaison d’anticorps et identification de paires ELISA |
|---|---|---|---|---|---|---|
| ELISA Standard | ATX-PACK1M | X | ||||
| ELISA Premium garanti | ATX-PACK2M | X | X | X | ||
| WB premium garanti | ATX-PACK3M | X | X | X | X | |
| Cytométrie en flux premium garantie | ATX-PACK4M | X | X | X | X | |
| ELISA Sandwich Premium garantie | ATX-PACK5M | X | X | X | X | X |
| IF premium garantie | ATX-PACK6M | X | X | X | X | |
| IP premium garanti | ATX-PACK7M | X | X | X | X | |
| Peptide garanti | ATX-PACK8M | X | X | X | ||
| Pack à modification spécifique garantie | ATX-PACK9M | X | X | X | ||
| IHC premium garantie | ATX-PACK10M | X | X | X |
Pourquoi la technologie des hybridomes génère
les meilleurs anticorps pour la recherche clinique et les diagnostics?
Les diagnostics à base d’anticorps comptent parmi les technologies les plus performantes pour la détection précise et rapide de marqueurs de maladie, de toxines ou d’autres composants dangereux faiblement abondants dans des échantillons complexes. Ces tests ont évolué vers de multiples formats en réponse à la demande croissante d’outils précis, rapides et sensibles pour soutenir le domaine florissant de la médecine personnalisée et ciblée.
C’est dans ce but que plusieurs dosages immunologiques ont été mis au point. La plupart de ces tests utilisent des anticorps marqués générés par la technologie des hybridomes. Cette préférence pour les réactifs générés par les hybridomes est justifiée par leurs affinités, leurs stabilités et leurs spécificités intrinsèquement plus élevées.
En outre, parmi tous les réactifs utilisés dans le diagnostic et l’imagerie médicale, les anticorps sont les seuls réactifs suffisamment sensibles pour reconnaître les modifications post-traductionnelles (PTM). Ainsi, le développement d’anticorps anti-PTM peut être utilisé pour détecter le plus tôt possible des modifications spécifiques causant des maladies.
Plusieurs études montrent que la détection de ces modifications aux premiers stades de la maladie peut radicalementchanger le pronostic, ce qui fait des anticorps les réactifs idéaux pour les applications de diagnostic à haut débit.
Les avantages uniques de la génération d'hybridome
pour des applications diagnostic
La production d’hybridomes est la technologie dominante pour les applications de diagnostic. Ces lignées cellulaires hybrides représentent une approche robuste et mature qui a fait ses preuves dans la production rentable d’anticorps de haute qualité.
Les anticorps générés par les hybridomes sont également connus pour leur plus grande stabilité, ce qui les rend idéaux pour tester la présence de marqueurs spécifiques, même dans des environnements difficiles et complexes. En outre, contrairement aux autres outils de diagnostic, les anticorps présentent l’avantage unique de permettre des mesures quantitatives spatiales, temporelles et précises.
Le processus de production d’anticorps par des hybridomes est bien établi et simple. En outre, elle confère un avantage unique par rapport aux procédés de production in vitro : une maturation d’affinité in vivo très efficace qui permet de gagner du temps en évitant de devoir modifier ces réactifs avant de les utiliser.
En fonction de l’application finale et de la nature du biomarqueur, ces lignées cellulaires sécrétant des anticorps peuvent être générées en utilisant des protéines intégrales, des peptides ou de l’ADN pour une immunisation efficace. Cette dernière est également considérée comme l’une des approches les plus efficaces pour générer des anticorps ciblant des biomarqueurs membranaires ou instables.
Dans quels domaines les outils de diagnostic
par anticorps sont ils utilisés?
Le faible coût et la stabilité de ces biomolécules ont favorisé le développement de tests biologiques à base d’anticorps et de techniques d’imagerie diagnostique dans plusieurs domaines, notamment :
- Cancer et maladies auto-immunes – ces deux maladies présentent un paysage pathologique complexe régi par des modifications génétiques et épigénétiques. Dans ces deux types d’affections, il est crucial de poser un diagnostic précis et en temps utile pour éradiquer les cellules et les tissus cancéreux ou arrêter la progression des réponses auto-immunes agressives. Les anticorps, en raison de leur spécificité et de leur sensibilité élevées, sont essentiels pour la détection précoce de ces pathologies et, par conséquent, pour améliorer le pronostic des maladies.
- Maladies infectieuses – les anticorps peuvent donner des informations précises sur le type d’agent pathogène et l’état de l’infection. En raison de leur faible coût, de leur stabilité et de leur flexibilité en termes de parallélisation et de miniaturisation, les anticorps constituent les meilleurs outils pour surveiller et contrôler l’apparition de foyers de maladies infectieuses.
- Allergies – le test de sensibilisation aux IgE est la pierre angulaire de la détection des affections allergiques. Comme toutes les autres maladies, les allergies peuvent être suivies avec précision in vivo ou in vitro à l’aide d’anticorps de haute affinité.
- Sécurité alimentaire – le risque imposé par les maladies d’origine alimentaire est souvent négligé, mais ces affections font encore peser une lourde charge sur nos systèmes de soins de santé. En raison de leur flexibilité, de leur spécificité et de leur stabilité, les anticorps générés par les hybridomes peuvent être rapidement adaptés et utilisés dans les tests de surveillance des aliments, réduisant ainsi les effets imprévisibles de ces maladies silencieuses.
Les formats conventionnels de tests diagnostics
utilisant les anticorps
La validation des anticorps destinés à des applications de diagnostic implique de les tester dans les bonnes conditions de test et avec les types d’échantillons appropriés, ainsi que de développer les contrôles positifs et négatifs adéquats pour minimiser la liaison hors cible et maximiser le signal de détection.
C’est pour cette raison que tous nos clients reçoivent un échantillon purifié de l’anticorps généré par notre technologie des hybridomes afin qu’ils puissent le tester avec leurs échantillons dans des conditions de test spécifiques. Notre double procédure de validation (en interne et par le client) garantit que l’anticorps de diagnostic est ajusté pour obtenir les meilleures performances possibles dans des conditions réelles.
La plupart des immunodosages actuellement utilisés peuvent être conçus pour une détection directe (utilisation d’un seul anticorps pour la liaison et la détection de l’antigène) ou indirecte (utilisation de l’anticorps primaire pour la liaison de l’antigène et d’un anticorps secondaire pour la détection et l’amplification du signal). En outre, les anticorps de détection peuvent être marqués avec un large éventail de substrats différents, notamment chromogènes, fluorogènes ou chimioluminescents.
Parmi les différents formats d’immunodosage, l’ELISA et la cytométrie de flux se sont imposés comme les meilleures approches pour le dépistage à haut débit et la détection précoce de maladies particulièrement complexes et agressives.
Dans tous les cas, la validation des anticorps produits par les hybridomes reste vitale. Ainsi, le développement de ces réactifs doit tenir compte de la :
- 1 Types de cellules ou de tissus qui seront utilisés dans chaque essai spécifique
- 2 Conditions de l’essai
- 3 Systèmes de lecture et paramètres de multiplexage (combien de cibles seront détectées dans un seul test).
Actuellement, les immunodosages les plus utilisés pour le diagnostic sont les suivants :
Immunohistochimie (IHC) et immunocytochimie (ICC)
L’IHC et l’ICC sont des méthodes basées sur les anticorps pour la coloration d’échantillons spécifiques de cellules (ICC) ou de tissus (IHC). Ensemble, ils représentent une technique puissante basée sur la microscopie qui fournit une sortie visuelle et spatiale claire au niveau tissulaire ou cellulaire de marqueurs spécifiques et de leur corrélation avec différents types de cellules, compartiments cellulaires ou états biologiques.
Les anticorps utilisés dans les tests IHC ou ICC, sont labelisés avec des réagents chromogènes comme la peroxidase HRP,qui nécessitent ensuite un substrat chimique pour produire un changement de couleur, ce qui rend les échantillons faciles à visualiser sous un microscope optique. Ces tests se prêtent également au multiplexage (l’utilisation de plusieurs marqueurs rapporteurs enzymatiques pour produire différentes couleurs pour différents antigènes).
Les tests conventionnels d’IHC et d’ICC utilisent souvent des tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) qui préservent la morphologie histologique mais peuvent masquer des épitopes importants. Il est possible d’inverser partiellement la réticulation chimique dans les tissus FFPE en utilisant des protocoles de récupération des antigènes. Cependant, ces protocoles doivent être optimisés pour chaque tissu et antigène spécifique.
Il est également possible d’utiliser des tissus congelés pour minimiser ce problème. Mais, dans les deux cas, on s’attend à ce que la conformation des épitopes cibles change pendant le traitement de l’échantillon, ce qui rend la validation de l’anticorps dans le type de cellule ou de tissu spécifique vitale pour assurer le succès des expériences IHC/ICC.
Western blot (WB)
Le WB est une méthode largement utilisée pour séparer et détecter les protéines. Elle consiste à transférer (également appelé blotting) des protéines, préalablement séparées par électrophorèse, d’un gel de polyacrylamide à une membrane de nitrocellulose pour les visualiser. La membrane est ensuite bloquée et des anticorps spécifiques aux marqueurs (marqués avec des substrats chromogènes, fluorogènes ou chimioluminescents) sont ajoutés pour l’imagerie des protéines.
Ce test immunologique est généralement réalisé dans des conditions dénaturantes, ce qui signifie que les structures secondaires et tertiaires du marqueur souhaité sont perdues. Le développement d’anticorps pour ces applications doit tenir compte de cette perte de la structure native. Plus important encore, il reste essentiel de valider les anticorps pour la BM dans des conditions dénaturantes afin de s’assurer qu’ils ne détectent que le marqueur d’intérêt.
Malgré sa sensibilité accrue, les tests WB restent complexes et demandent beaucoup de travail. C’est pourquoi, de nos jours, elles sont surtout utilisées pour confirmer les résultats obtenus par d’autres techniques dans les diagnostics précliniques et cliniques.
Immunoprécipitation (IP)
La PI est une technique populaire pour capturer et concentrer les protéines à partir de mélanges complexes. Il permet l’enrichissement de marqueurs spécifiques, ce qui est particulièrement utile lorsqu’il s’agit de protéines peu abondantes.
En plus de permettre l’étude d’une protéine en dehors de son environnement d’origine, la PI peut être utilisée pour étudier l’interaction de la protéine cible avec d’autres molécules (protéines, ADN, ARN, cellules, etc.), car ces complexes ont tendance à co-précipiter. Des réactifs supplémentaires peuvent être utilisés pour stabiliser ces complexes avant la précipitation, ce qui renforce l’utilité du test pour l’étude d’interactions importantes dans le contexte de la maladie.
Cette technique est souvent utilisée en tandem avec la spectrométrie de masse, ce qui constitue une méthode puissante pour mesurer et identifier les protéines peu abondantes dans des échantillons complexes. Ainsi, les anticorps destinés à une utilisation en PI doivent être soigneusement validés dans les conditions de test pour garantir que seule la protéine ou le complexe cible est récupéré efficacement à partir d’échantillons spécifiques.
Immunofluorescence (IF)
Les anticorps marqués par fluorescence sont les réactifs essentiels des méthodes IF, un type spécifique d’approche d’immunomarquage. Par essence, l’IF est similaire à l’IHC/ICC. Elle peut donc être utilisée pour détecter et visualiser une protéine d’intérêt sur des tissus fixes (FFPE) ou congelés (immunohistofluorescence) ou des types de cellules particuliers (immunocytofluorescence).
La différence réside dans la façon dont les échantillons sont visualisés. Par exemple, les tests IHC/ICC reposent sur un rapporteur enzymatique et un substrat pour produire un changement de couleur, tandis que les tests IF ne nécessitent qu’un marqueur fluorescent et les lasers appropriés pour produire un signal. Dans les deux cas, le multiplexage (détection de plusieurs antigènes) est possible à condition que les fluorochromes ou les rapporteurs enzymatiques émettent des signaux qui ne se chevauchent pas.
La mise au point d’anticorps pour cette approche peut s’avérer particulièrement difficile, car ces réactifs doivent être hautement spécifiques de la cible et, en même temps, de la cible, causent un bruit de fond minimal (liaison hors site minimale). En outre, lorsque différents conjugués d’anticorps sont utilisés dans le même essai, il est encore plus important de valider la méthode d’analyse de l’anticorps. unpanel ou un cocktail des différents anticorps afin de garantir que les données générées par les expériences d’immunofluorescence soient facilement interprétées.
Cytométrie en flux
Ces tests ont rapidement gagné du terrain par rapport aux immuno-essais classiques pour la détection rapide des marqueurs de maladies dans les échantillons liquides (par exemple, les fluides, le sang, le plasma, etc.). Lesanticorps utilisés en cytométrie en flux sont généralement utilisés pour détecter des marqueurs de faible abondance (diagnostics) ou pour déterminer l’efficacité de traitements spécifiques, contribuant ainsi de manière substantielle aux efforts de développement d’approches thérapeutiques ciblées ou personnalisées.
Ces immunodosages peuvent être réalisés avec des échantillons fixés ou non ; de plus, ils utilisent généralement des anticorps marqués par fluorescence dans des conditions de multiplexage. En raison de sa sensibilité accrue, la liaison hors cible peut devenir problématique en cytométrie de flux. Pour cette raison, la validation doit prévoir les problèmes potentiels causés par les différents types d’échantillons, les protocoles de fixation des cellules et les conditions de multiplexage.
ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)
ELISA est un test immunologique sur plaque pour la détection de marqueurs dans des échantillons complexes. Plusieurs formats ELISA sont actuellement utilisés dans les diagnostics cliniques en fonction de l’abondance de la cible. En général, les anticorps ELISA sont marqués avec des marqueurs enzymatiques (comme dans les applications IHC/ICC) et ces tests peuvent être conçus pour la détection ou la quantification d’antigènes.
De tous les formats ELISA, l’ELISA sandwich est devenu le plus utile et, par conséquent, le plus difficile à développer. Le test ELISA sandwich utilise deux anticorps primaires qui lient des épitopes non chevauchants d’un antigène donné. Comme pour tous les autres dosages immunologiques, la validation des anticorps pour ELISA doit tenir compte du type d’échantillons et des conditions de détection à utiliser.
Vous pourriez également être intéressé par:
