Optimisez vos chances de produire efficacement votre protéine recombinante ! Notre service de production de protéines dans E. coli comprend jusqu'à 32 tests d'expression de protéines en standard pour garantir que même les protéines les plus difficiles à exprimer ont une forte probabilité d'être produites.
Quel est notre secret pour optimiser
la production de protéines dans E. coli ?
Prix compétitif
Notre forfait de production d’E. coli commence à partir de 1650€.
32 tests d'expression
Nos forfaits d’expression de protéines comprennent jusqu’à 32 tests de conditions d’expression à ce prix.
Qualité garantie
Notre forfait de production de protéines E. coli comprend une large gamme d’analyses CQ.
Outil d'optimisation des gènes
En tant qu’expert en synthèse de gènes, ProteoGenix peut inclure la synthèse de gènes et l’optimisation efficace des codons dans sa production de protéines E. coli.
Production à petite et grande échelle
Nous assurons l’expression de protéines du milligramme au gramme dans E. coli.
Chargés de projets de niveau PhD
Nos responsables de comptes doctoraux sont à votre disposition pour vous guider dans notre solution d’expression de protéines dans E. coli.
Quels sont les 32 tests inclus dans notre
Service d'expression de protéines E.coli ?
La production de protéines recombinantes est très technique et nécessite une forte expertise car un seul protocole de production ne peut convenir à tous les types de produits. Avec plus de 16 ans d’expérience et plus de 1500 protéines exprimées, ProteoGenix a développé un protocole interne comprenant jusqu’à 32 tests de conditions d’expression dans son paquet de « Production de protéines en E. coli » pour répondre au mieux à vos besoins. Les possibilités techniques sont presque infinies et une expérience aussi longue est décisive.
Les conditions d’expression varient :
-
Souches E. coli
-
Température
-
Temps d’induction
-
Méthode d’extraction des protéines
-
Méthode de purification
Vous avez besoin de produire une protéine dans E. coli ou vous voulez plus d’informations sur nos capacités d’expression de protéines dans E. coli ? Notre chargé d’affaires est à votre disposition pour répondre à vos questions.
Pour les protéines difficiles à exprimer, nous disposons également d’un service dédié au criblage à haut débit qui permet d’augmenter la probabilité de trouver les conditions les plus optimales. Plus les conditions sont testées, plus la probabilité d’assurer une solubilité, une fonctionnalité, une productivité optimales est élevée…
Toutes les conditions sont variées, depuis l’optimisation des codons, les vecteurs avec différents promoteurs, les séquences de protéines, les étiquettes de purification jusqu’à la méthode de purification elle-même, les conditions de clivage des étiquettes, la méthode de repliement et la formulation. L’avantage de l’expression des protéines dans E. coli est la gamme infinie de solutions et de technologies. ProteoGenix a une grande expérience de toutes ces technologies grâce à la grande variété de projets réalisés jusqu’à présent.
Organigramme de notre expression de la protéine dans E. coli
- Construction de vecteur d’expression
Synthèse de gènes, y compris l’optimisation des codons pour la production de E. coli.
Subclonage de gènes dans un vecteur d’expression à haut rendement.
- Transformation de la souche E. coli
Transformation du plasmide dans diverses souches bactériennes.
- Test de 32 conditions d’expression des protéines
Évaluation des conditions d’expression de 32 protéines (température, temps d’induction, fractions).
Détermination des meilleures conditions de production de protéines.
Tests de purification des protéines.
- Expression des protéines, mise à l’échelle et purification
Expression et purification de la protéine 1L avec des conditions optimisées déterminées précédemment.
- Analyse CQ
Analyse SDS/PAGE et WB.
Analyse quantitative par la méthode Bradford.
Production de protéines dans E. coli : contenu des services
| Étape | Contenu | Délai | Livrables |
|---|---|---|---|
| Synthèse des gènes |
|
3 à 4 semaines |
|
| Évaluation de l’expression des protéines à petite échelle |
|
2 à 3 semaines |
|
| Mise à l’échelle de la production de protéines |
|
2 à 3 semaines |
|
Options disponibles :
|
|||
Étude de cas : expression de protéines dans E. coli
Objectif du projet
Un de nos clients a demandé une production de protéines recombinantes dans E. coli. Ce projet comprenait également la synthèse du gène et le sous-clonage dans un vecteur d’expression (informations incluses dans le rapport PDF).
Tests d'expression des protéines
L’objectif des tests d’expression des protéines est de déterminer les conditions optimales d’expression des protéines par l’évaluation :
-
E. coli souche utilisée pour la production de protéines
-
Stratégie d’induction
-
Température
-
Temps d’induction
-
Meilleure condition d’extraction des protéines (natives ou dénaturées)
Plus de détails sur le protocole sont fournis dans le rapport PDF complet.
Figure 1 : Tests d’expression de la protéine cible. Coloration au bleu de Coomassie Analyse par PAGE réductrice de NPE et DPE. MW. Marqueur de poids moléculaire. Ø. Culture de bactéries non induites (contrôle négatif). Induction avec IPTG 1mM.
La protéine est exprimée à un niveau élevé dans toutes les souches testées, et est principalement localisée dans le NPE (Figure 1). Les conditions optimales pour l’expression native sont indiquées dans le rapport PDF complet.
Tests de purification de protéines à petite échelle
Un test de purification à petite échelle (culture de 200 ml) a été réalisé dans des conditions natives. Matériel de départ : NPE préparé après une expression native optimale. Les détails du protocole de purification des protéines sont disponibles dans le rapport PDF complet.
Figure 2 Test de purification de la protéine cible. Analyse par PAGE réductrice avec coloration au bleu de Coomassie A. Profil de purification. B. CQ de l’échantillon final (après échange de tampon) MW. Marqueur de poids moléculaire. IN. Entrée. FT. Flow through W1-W3. Les étapes du lavage. E1-E9. Fractions éluées.
La protéine cible a été purifiée dans des conditions natives (Figure 2). Le rendement et la pureté obtenus sont détaillés dans le tableau 1.
|
N° de souche |
Pureté* |
Rendement (mg/L)** |
|
|
XXX |
No.1 | 90% | 146 |
Tableau 1 : rendements de production et de purification Tampon final : TBS pH8.0. **Estimations basées sur les tests de culture de 200ml. *Basé sur les charges de 2µg dans les Figures 2B (flèches vertes).
Production de protéines dans E. coli : avantages et inconvénients
E. coli est un organisme bien caractérisé pour la production de protéines et a été le premier hôte exprimant une protéine recombinante thérapeutique approuvée.
Jusqu’au milieu des années 90, E. coli était considéré comme le meilleur choix pour la production biopharmaceutique en raison de plusieurs avantages tels que :
-
Cinétique de croissance rapide,
-
Possibilité de réaliser des cultures à haute densité cellulaire,
-
Transformation rapide et facile des plasmides.
Ces avantages font de E. coli le meilleur choix si vous recherchez une méthode solution d’expression de protéines rapide et rentable d’expression des protéines.
Cependant, la production de protéines dans E. coli peut ne pas être la solution la plus pertinente pour l’expression de structures protéiques complexes incluant des modifications post-traductionnelles ou des productions biothérapeutiques en raison des niveaux élevés d’endotoxine (qui peuvent être éliminés grâce à notre service d’élimination des endotoxines).
Pour obtenir plus d’informations sur notre production de protéines dans E.coli n’hésitez pas à contacter notre responsable de compte dédié.
L'exploitation des corps d'inclusion pour un haut
rendement d'expression de la protéine dans E. coli
Les corps d’inclusion sont souvent considérés comme un goulot d’étranglement dans la production de protéines recombinantes, mais ils sont souvent liés à des niveaux d’expression élevés des protéines. Plusieurs approches ont été développées pour limiter leur formation mais seuls des résultats irréguliers ont été obtenus car la production de protéines dépend du produit. Il est par exemple possible de produire à basse température en utilisant des souches spécifiques. Cependant, les organismes d’inclusion peuvent présenter plusieurs avantages :
-
Ils empêchent la protéolyse des protéines
-
Ils protègent la cellule hôte lorsque la protéine recombinante est toxique dans sa conformation native.
-
Ils sont principalement composés de protéines recombinantes
-
Ils sont faciles à purifier
Ainsi, de nombreux microbiologistes ont développé des protocoles de repliement des protéines permettant l’exploitation de ces corps d’inclusion comme source de protéines recombinantes.
Chez ProteoGenix, nous avons développé une plateforme unique de repliement des protéines, conçue pour exploiter au mieux l’expression des protéines recombinantes et répondre à vos besoins. Pour obtenir plus d’informations à ce sujet, n’hésitez pas à contacter nos gestionnaires de compte dédiés.
