Notre service de test d'expression de protéines à haut débit est la solution pour surmonter les défis les plus exigeants concernant les protéines difficiles à exprimer ! ProteoGenix a développé une plateforme HTP dédiée à l'optimisation de l'expression des protéines. Notre solution : plus de 1000 conditions d'expression soigneusement sélectionnées et testées en parallèle pour faire exploser votre production de protéines dans un délai très court.
Pourquoi choisir ProteoGenix pour réaliser votre
optimisation de l'expression des protéines ?
Expression de protéines à la carte
Nous concevons les conditions d’expression les plus appropriées pour tester le respect des spécifications.
Gagner du temps
Nous pouvons réaliser 1000 tests en 4 semaines grâce à notre plateforme à haut débit entièrement automatisée.
La solution ULTIME
pour les protéines difficiles à exprimer
Une expression protéique difficile ? Notre criblage à haut débit de l’expression des protéines permet de surmonter tous les obstacles.
Une expertise unique
en matière d'expression protéique
Nous avons déjà exprimé plus de 1500 protéines depuis 2003.
5 systèmes
d'expression
Nous avons une connaissance approfondie de 5 systèmes d’expression différents : E. coli, B. subtilis, levure, baculovirus/cellules d’insectes et cellules de mammifères.
XtenCHOTM
inclus !
Notre service peut inclure notre système d’expression mammifère à haute performance.
Test d'expression de protéines à haut débit
pour les protéines difficiles à exprimer
ProteoGenix combine les connaissances de ses meilleurs experts en production de protéines pour vous fournir la plateforme d’expression de protéines à haut débit la plus avancée. Notre plateforme à haut débit a été conçue en suivant une règle : « Plus nous testons de conditions pertinentes, plus nous avons de chances de trouver le moyen d’exprimer votre protéine avec succès ». Ainsi, notre plateforme d’expression de protéines à haut débit nous permet de tester 1000 conditions en 4 semaines afin de répondre, voire de dépasser vos exigences en termes de :
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Productivité
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Pureté
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Solubilité
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Stabilité
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Activité biologique
L’obtention de tels résultats n’est possible qu’en proposant un large éventail de conditions d’expression des protéines. Voici une liste de paramètres que ProteoGenix peut faire varier :
CAPACITÉS DE BIOLOGIE MOLÉCULAIRE
Synthèse des gènes
PURIFICATION
Vecteurs
PURIFICATION
Peptide signal
250+
Marqueur de purification
15+
Marqueur de solubilité
15+
SOUCHES ET LIGNES CELLULAIRES
CONDITIONS DE CULTURE
Température
Induction
conditions
Médias
Criblage
Extraction
Méthode
Fermentation
Illimitée
PURIFICATION
Vous rencontrez des difficultés dans l’optimisation de l’expression des protéines ? Contactez nos chargés d’affaires de niveau PhD pour libérer le potentiel de votre production.
Notre flux de travail à
haut-débit pour l'expression des protéines
- Détermination de la meilleure paire hôte/vecteur
Test de plusieurs transformants :
Sélection des transformants présentant les meilleurs résultats
Tests de purification sur le meilleur couple hôte/vecteur
GO / NO GO 1
- Optimisation de l’expression des protéines en flacon
Optimisation de plusieurs conditions de culture (température, temps d’induction, etc.).
Détermination de la meilleure stratégie d’alimentation
GO / NO GO 2
- Optimisation de la purification des protéines
GO / NO GO 3
- Optimisation de l’expression des protéines en flacon
Optimisation du fermenteur/bioréacteur
Paramètres de fonctionnement
Purification des protéines de l’analyse CQ : SDS/PAGE, WB
Exemple d’un projet typique
- 4 souches d’E. coli
- 2 synthèse des gènes
- 4 lignées cellulaires de mammifères
- 4 vecteurs
- 2 marqueurs de purification
- 5 peptides signal
Tests
2 meilleures combinaisons de systèmes de construction
- 3 températures
- 5 optimisation de la purification
- 9 conditions d’induction
- 5 méthodes d’extraction
Tests
Sélection des meilleures conditions d’expression
1875 Tests
Notre processus de production de protéines à haut débit
| Étape | Contenu | Délai | Livrables |
|---|---|---|---|
| Détermination de la paire hôte/vecteur | Synthèse de gènes, y compris l’optimisation des codons Sous-clonage dans des vecteurs d’expression Purification des meilleurs résultats |
À déterminer en fonction du projet | Constructions de gènes Rapport détaillé comprenant les tests effectués Protéine purifiée à partir du test de purification |
| Optimisation de l’expression des protéines | Optimisation des conditions de culture | Échantillon d’essai si nécessaire Rapport détaillé |
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| Optimisation de la purification des protéines | Détermination de la meilleure stratégie de purification | Protéine purifiée Rapport détaillé |
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| Développement du processus | Optimisation des paramètres de fonctionnement du bioréacteur Analyse CQ |
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Options
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Influence de plusieurs paramètres sur l'expression des protéines
La production de protéines difficiles à exprimer nécessite de faire varier plusieurs paramètres qui peuvent fortement influencer le rendement final, la pureté, la stabilité, la solubilité et l’activité biologique. Si nous examinons plus précisément la productivité, voici quelques-uns des paramètres à prendre en compte pour optimiser l’expression des protéines :
Système d’expression
Le choix du meilleur système d’expression est de première importance lorsqu’il s’agit de l’expression de protéines. Ce choix dépendra de vos exigences : productivité élevée, repliement correct des protéines, modifications post-traductionnelles « de type humain » ou un compromis entre toutes ces exigences… Voici un petit tableau expliquant les paramètres essentiels à prendre en compte pour choisir le bon système d’expression :
Séquence du gène
La synthèse des gènes doit être optimisée pour l’organisme hôte par le processus dit d’optimisation des codons. Cette optimisation vise à éviter les codons rares dans la séquence de l’ARNm, ce qui limite le risque d’échec de l’expression des protéines et augmente les chances d’obtenir une production de protéines à haut rendement.
Vecteur
L’optimisation de l’expression des protéines dépend aussi en partie du choix du meilleur vecteur d’expression. La partie de la séquence non codante régule plusieurs éléments essentiels à l’expression des protéines :
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Le promoteur doit être adapté à la nature de la protéine à exprimer. Pour les protéines toxiques, les promoteurs à faible expression basale seront préférés. Les promoteurs forts sont privilégiés lorsque l’expression de protéines à haut rendement est requise.
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Le terminateur régule le renouvellement de l’ARNm et augmente la stabilité de l’ARNm dans le cytoplasme.
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L’origine de réplication contrôle le nombre de copies du plasmide. Le choix d’un plasmide à forte copie peut être une option si vous êtes confronté à un faible rendement d’expression des protéines.
Conditions d’expression
Plusieurs facteurs sont connus pour influencer l’expression des protéines :
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Température : dans les systèmes d’expression procaryotes tels que E. coli, l’expression des protéines entraîne un repliement incomplet des protéines et la formation de corps d’inclusion. Même si ces corps d’inclusion peuvent être exploités, l’induction de l’expression des protéines à une température plus basse permet une plus grande solubilité.
L’expression hypothermique de protéines dans des cellules de mammifères permet d’obtenir des rendements d’expression de protéines plus élevés. -
Concentration de l’inducteur : la diminution de la concentration de l’inducteur entraîne une réduction du taux de transcription, ce qui limite la formation d’agrégats (corps d’inclusion) et augmente la solubilité des protéines…
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Milieu : le milieu de croissance doit contenir tous les nutriments nécessaires pour favoriser l’expression des protéines recombinantes.
Cette liste est non exhaustive et ne représente qu’une partie des paramètres que ProteoGenix peut optimiser grâce à son service d’expression de protéines à haut débit. Contactez-nous pour parler de vos besoins spécifiques avec notre chargé d’affaires de niveau PhD qui définira avec vous les meilleurs paramètres à faire varier pour optimiser l’expression de vos protéines.
