5 SISTEMI
Con oltre 15 anni di grande esperienza nella produzione di proteine personalizzate e oltre 1.500 proteine prodotte con successo in 5 sistemi, ProteoGenix è leader nelle produzioni di proteine ricombinanti e anticorpi di difficile espressione. LEGGI ALTRO
Con oltre 15 anni di grande esperienza nella produzione di proteine personalizzate e oltre 1.500 proteine prodotte con successo in 5 sistemi, ProteoGenix è leader nelle produzioni di proteine ricombinanti e anticorpi di difficile espressione. LEGGI ALTRO
Offriamo servizi di espressione e purificazione di proteine su piccola e grande scala in tutte le 5 piattaforme a prezzi competitivi, nonché pacchetti personalizzati e più avanzati, in cui vengono testati, ad esempio, condizioni di espressione di proteine ricombinanti in vari sistemi in parallelo o con condizioni estese di espressione di proteine in uno specifico sistema. I nostri servizi includono tutte le fasi dalla sintesi genetica e dalla costruzione del vettore di espressione alla produzione della proteina pilota in matracci, all’espressione di proteine su grande scala in fermentatori e bioreattori.
Il nostro screening della condizione di espressione di proteine “high throughput” è progettato per risolvere i problemi correlati a solubilità, purezza, funzionalità, produttività, refolding o riformulazione. Questo obiettivo richiede la disponibilità e la padronanza di tutti i processi, strumenti e tecnologie esistenti. Con una lunga esperienza nell’espressione di proteine ricombinanti di tutti i tipi, quali anticorpi, enzimi, proteine di membrana, citochine ecc., e di tutte le specie, ProteoGenix ha sviluppato una serie di strumenti completa per affrontare qualsiasi sfida e offrire i servizi di ingegnerizzazione di proteine migliori del settore. Provate i nostri pacchetti, garantitidall’azienda di produzione di proteine più affidabile del settore.
E. coli
ESPRESSIONE DI PROTEINE
IN E. COLI
Espressione periplasmatica, test di refolding, pacchetti
garantiti, rimozione di endotossine, espressione personalizzata in E. coli,
produzione di proteine in batterio
Sistema multiplo
PACCHETTI DI ESPRESSIONE
IN SISTEMA MULTIPLO
Se non si sa quale sia il sistema ottimale, test su un massimo
di 5 sistemi, produzione di proteina purificata per
ogni sistema
B. subtilis
PRODUZIONE DI PROTEINE
IN B. SUBTILIS
Basso livello di endotossine,
secrezione di proteine ricombinanti,
caratterizzazione di proteine
Lievito
PRODUZIONE DI PROTEINE
IN LIEVITO
Saccharomyces cerevisia,
Pichia pastoris,
espressione stabile
HTP
SCREENING DI ESPRESSIONE
DI PROTEINE “HIGH THROUGHPUT”
Per proteine di difficile espressione, 1.000+
condizioni di espressione, piccola scala,
screening “high throughput”
Cellule di insetto
PRODUZIONE DI PROTEINE IN
CELLULE DI INSETTO/BACULOVIRUS
Sf9, Sf21, Hi5, proteine glicosilate,
purificazione di proteine, produzione
Produzione
Mammiferi
PRODUZIONE DI PROTEINE
IN CELLULE DI MAMMIFERO
Espressione transitoria, produzione di
anticorpi ricombinanti, purificazioni SEC e IEX,
Bassi livelli di endotossine, CHO, HEK293, BHK
Linea cellulare stabile
SVILUPPO DI LINE CELLULARI
STABILI
Sistemi liberi da IP, rendimento garantito, sviluppo di
processi, linea cellulare stabile HEK293 e
CHO
RAB
MONOCLONALI Y RICOMBINANTI :
PRODUZIONE DI ANTICORPI
Basso costo di produzione,
rendimento garantito,
varianti di anticorpi HTP
Grande scala
PRODUZIONE DI PROTEINE CON FERMENTAZIONE/BIOREATTORE
IN GRANDE SCALA
Da 1 a 4.000 l in ognuno dei 5 sistemi,
Servizi di purificazione su grande scala,
Servizi di sviluppo di processi
Testimonal :Produzione personalizzata di proteine
“Recentemente ho scelto ProteoGenix per produrre una proteina ricombinante in cellule HEK293. L’alta produttività e forte attività della proteina ottenuta, probabilmente dovute a glicosilazione e folding corretti, ci hanno permesso di ottenere risultati esaltanti negli studi funzionali e raggiungere nuovi obiettivi intermedi del nostro progetto di ricerca. La qualità del servizio fornito e la comunicazione chiara e cordiale con l’account manager responsabile del nostro progetto sono state decisive per il successo. Sono lieto di consigliare ProteoGenix per la produzione di proteine ricombinanti.”
Dottore di ricerca e Ricercatore capo
presso CNRS
Perché scegliere ProteoGenix per la produzione di proteine ricombinanti?
Perché scegliere ProteoGenix ?
Più di 16 anni di eccezionale track record nella produzione di proteine difficili da esprimere
5 sistemi di espressione di proteine disponibili e una serie completa di strumenti per risolvere qualsiasi problema di espressione di proteine
Soluzione integrata dal gene alla proteina, sviluppo di processi e produzione su grande scala. Risultati: servizio più rapido, maggiore tasso di successo, meno lavoro amministrativo
Ceppi e linee cellulari liberi da IP
Produzioni su piccola e grande scala in lotti da 1 a 4.000 l
Produttività fino a 800 mg/l in espressione transitoria e 5 g/l in espressione stabile
Stabilimenti di fermentazione
Caso di studio:
Esempio di produzione di beta-glucosidasi in cellule di insetto
SERVIZIO FORNITO
Un cliente ha richiesto la produzione di una proteina beta-glucosidasi ricombinante utilizzando un sistema di espressione in baculovirus (produzione in cellule di insetto). Il cliente ha ordinato un pacchetto completo di cellule di insetto che includeva espressione su piccola scala e test di purificazione seguiti da produzione e purificazione pilota di 1 l. Abbiamo ottenuto un rendimento di 370 mg/l e fornito 60 mg di proteina espressa su piccola scala. La produzione pilota di 1 l non era più necessaria, pertanto non è stata addebitata al cliente. Il servizio fornito includeva:
BIOLOGIA MOLECOLARE
Il cDNA codificante per la proteina beta-glucosidasi è stato sintetizzato chimicamente dopo l’ottimizzazione della sequenza per l’espressione in cellule di insetto. È stato quindi subclonato in un vettore di espressione proprietario. Una sequenza codificante per un tag 6His è stata aggiunta per ulteriore purificazione.
TEST DI ESPRESSIONE
GENERAZIONE DI STOCK DI VIRUS P1
Figura 1. Analisi dell’espressione in cellule di insetto durante la generazione di P1.
Sinistra. Colorazione con Blu di Coomassie Destra.WB con anticorpo anti-His (sostrato ECL) “-“. Coltura di controllo
non transfettata. 1 e 2 sono transfettazioni con 2 diversi cloni di BacmidConclusione della fase di generazione del virus P1
È stata osservata una striscia di proteine con peso molecolare della proteina beta-glucosidasi mediante SDS-PAGE in estratti di proteina nativa. Questo risultato è stato confermato con il test Western Blot (Figura 1, frecce verdi). Per i test di espressione è stato utilizzato il clone ricombinante n.1 in Bacmid.
AMPLIFICAZIONE DEL VIRUS E TEST DI ESPRESSIONE
Figura 2. Test di espressione delle proteine con stock P2.
Colorazione con Blu di Coomassie. Sinistra. Cellula tipo 1.Destra. Cellula tipo 2. “-“. Coltura di controllo negativa.Conclusione dei test di espressione
I test di espressione con P2 confermano che il target è presente ad alti livelli negli estratti di proteina nativa (Figura 2, frecce verdi). Condizioni ottimali per l’espressione nativa: Figura 2, freccia rossa = limite di identificazione (loi)
TEST DI PURIFICAZIONE
Figura 3. Test di purificazione di proteine in piccola scala. Colorazione con Blu di Coomassie.
Sinistra. Profilo di purificazione. Destra. QC finale del pool di purificazione
IN. Input. FT. Flusso. W1-W3. Fasi di lavaggio. E1-E9. Frazioni eluite.Conclusione dei test di purificazione su piccola scala
È possibile produrre e purificare proteine beta-glucosidasi ricombinanti in condizioni native. La purezza è ≥ 95% e il rendimento di produzione/purificazione di circa 370 mg/l. Il sistema di espressione in baculovirus è risultato la scelta ottimale per questa proteina.
Quale sistema scegliere per la produzione di proteine ricombinanti?
CONFRONTO TRA 5 SISTEMI DI ESPRESSIONE OFFERTI DA PROTEOGENIX:
SISTEMI DI ESPRESSIONE DI CELLULE PROCARIOTE VS. EUCARIOTELa tabella seguente illustra i vantaggi generali dei cinque diversi sistemi di espressione di proteine eterologhe per la produzione di proteine ricombinanti. Naturalmente le caratteristiche possono variare a seconda della proteina. Più asterischi indicano sistemi migliori.
Sistema
di espressioneTempo Costo PTM Bassi livelli di endotossine Processo di scale-up semplice Secrezione E. coli **** **** * * *** * B. subtilis *** *** * **** *** ** Lievito (P. pastoris,
S. cerevisiae)* *** ** **** ** ** Baculovirus/
Cellule di insetto* ** *** **** * *** cellule di mammifero *** * **** **** ** **** La tabella seguente illustra i vantaggi generali dei cinque diversi sistemi di espressione di proteine eterologhe per la produzione di proteine ricombinanti. Naturalmente le caratteristiche possono variare a seconda della proteina. Più asterischi indicano sistemi migliori.
Sistema
di espressioneTempo Costo PTM Bassi livelli di endotossine Processo di scale-up semplice Secrezione E. coli **** **** * * *** * B. subtilis *** *** * **** *** ** Lievito (P. pastoris,
S. cerevisiae)* *** ** **** ** ** Baculovirus/
Cellule di insetto* ** *** **** * *** cellule di mammifero *** * **** **** ** **** Sistema di espressione Durata Prezzo E. coli 3-6 settimane A partire da
1 650€B. subtilis 4-6 settimane Lievito (P. pastoris,
S. cerevisiae)6-7 settimane Baculovirus/
Cellule di insetto8-11 settimane cellule di mammifero 7-9 settimane DURATA E PREZZO
Sistema di espressione Durata Prezzo E. coli 3-6 settimane A partire da
1 650€B. subtilis 4-6 settimane Lievito (P. pastoris,
S. cerevisiae)6-7 settimane Baculovirus/
Cellule di insetto8-11 settimane cellule di mammifero 7-9 settimane Contenuto del servizio
Espressione su piccola scala e valutazione della purificazione con più condizioni di espressione testate.
Produzione e purificazione di 1 lALCUNI PACCHETTI DI SISTEMI DI MULTI-ESPRESSIONE
Codice pacchetto Tipo Sistemi Prezzo ATX-PTR4S01 4 sistemi
Pacchetto di espressioneE. coli/lievito/baculovirus/
cellule di mammiferoA partire da
2 450€ATX-PTR3S05 3 sistemi
Pacchetto di espressioneB. subtilis/lievito/baculovirus ATX-PTR2S02 2 sistemi
Pacchetto di espressioneE. coli / baculovirus Il sistema usato più comunemente per la purificazione di proteine ricombinanti è E. Coli. Certamente, è il sistema più semplice, rapido e conveniente per la produzione di una proteina personalizzata. Le colture batteriche crescono molto più rapidamente rispetto alle cellule di insetto, alle cellule di mammifero o ai lieviti. Pertanto, è più facile e veloce eseguire un ampio numero di test di condizioni diverse. Sono anche disponibili ulteriori soluzioni per il test ed è possibile quindi ottenere un alto tasso di successo di espressione delle proteine ricombinanti. Il rendimento dell’espressione transitoria delle proteine ricombinanti è inoltre generalmente molto più alto rispetto a lievito, baculovirus/cellule di insetto o di mammifero. La produzione di proteine ricombinanti in E. coli (Escherichia Coli) è spesso la soluzione preferita proposta da ProteoGenix quando l’applicazione finale richiede grandi quantità di proteine, come la cristallografia e la risonanza magnetica nucleare (RMN) e quando non sono richieste modifiche post-traslazionali (PTM). Tuttavia, gli svantaggi principali del sistema in E. Coli sono la grande quantità di endotossine che rimangono nel campione finale e l’assenza di modifiche post-traslazionali. È possibile rimuovere le endotossine ma non è conveniente in una fase industriale, mentre non c’è molto da fare riguardo ai problemi di PTM, a parte usare un diverso sistema di espressione. Con questi cinque sistemi, siamo in grado di soddisfare le richieste di un grande quantitativo d’ordine di sintesi di proteine e perciò abbiamo un tasso di successo di oltre il 95% nella sintesi di proteine ricombinanti. Lavoriamo costantemente all’integrazione di nuovi sistemi e soluzioni per fornire il miglior livello di servizio possibile per i clienti che desiderano acquistare servizi di produzione di proteine ricombinanti di alta qualità.
Per qualsiasi dubbio in merito al sistema da utilizzare, in qualità di leader nella produzione di proteine, siamo in grado di guidarvi dal gene alla proteina per definire la strategia ideale tenendo in considerazione il tempo a disposizione, il vostro budget e le caratteristiche delle proteine richieste.
Team, capacità, organizzazione
I nostri laboratori per la produzione di proteine ricombinanti sono organizzati in diverse piattaforme e laboratori di supporto, per assicurare un servizio della massima qualità, la massima purezza del prodotto, il minimo rischio di contaminazione e la migliore organizzazione per un servizio rapido e affidabile.
Disponiamo di una piattaforma per ciascuno dei cinque sistemi e un laboratorio separato per il controllo della qualità, per la biologia molecolare, per il confezionamento, ecc. Ciascuna piattaforma viene gestita da team leader esperti che assicurano la consegna di proteine che corrispondono alle specifiche iniziali del cliente. Dopo oltre 1.500 proteine prodotte ad oggi e team specializzati in ciascun sistema, le nostre competenze non hanno rivali.
Applicazioni della produzione
di proteine ricombinanti personalizzateLe proteine ricombinanti di ProteoGenix sono utilizzate in un’ampia gamma di applicazioni e i nostri clienti si occupano generalmente di Scienze della vita, nello specifico nei settori farmaceutico, della diagnostica, delle biotecnologie, agro-alimentare, delle scienze agricole, delle nuove energie, della cosmesi, laboratori di ricerca nazionali, ecc.
Di seguito un elenco non esaustivo delle applicazioni:
