SERVIZI GARANTITI
Accelerate il vostro programma di sviluppo con i servizi di anticorpi phage display di ProteoGenix e realizzate i vostri anticorpi ricombinanti purificati in meno di 2 mesi. Le nostre librerie includono vari formati di anticorpi monoclonali tra cui Fab, scFv o VHH e diverse specie. Grazie alle nostre librerie umane ad alta diversità lo sviluppo dell'anticorpo terapeutico non richiede umanizzazione e possiamo offrirvi solide garanzie.
Perché scegliere i servizi di anticorpi
phage display di ProteoGenix?
Leganti garantiti
Garantiamo ALMENO 3 leganti esclusivi contro l’antigene.
Liberi da proprietà intellettuale
Il cliente ha la proprietà completa della sequenza di anticorpi generata.
Librerie di anticorpi phage display ad alta diversità
Le nostre librerie premium contengono almeno 109 diverse varianti
Formati scFv, Fab o VHH disponibili
Grazie alla varietà delle nostre librerie possiamo proporre un’ampia gamma di formati per numerose applicazioni.
Ampia varietà di specie disponibili
Anticorpi monoclonali da topo, pecora, lama, coniglio ecc. Oltre alle nostre librerie naive, potete scegliere di sviluppare anche librerie immunitarie da specie specifiche senza limitazioni..
Risparmiate tempo
Dall’antigene all’anticorpo in meno di 7 settimane
Nessun uso di animali
Lo screening di librerie naive non richiede l’utilizzo di animali.
Acquistate la vostra libreria
Acquistate le nostre librerie naive o le vostre librerie immunitarie.
Librerie di anticorpi phage display immunitarie o naive?
| Librerie naive | Librerie immunitarie | |
|---|---|---|
| Specie | Umana, coniglio, alpaca | Nessuna limitazione eccetto libreria umana |
| Formati | Fab, scFv, VHH | Fab, scFv, VHH |
| Numero di leganti | ++ | +++ |
| Affinità dei leganti | ++ | +++ |
| Potenziali problemi di immunogenicità | No | Sì |
| Uso di animali | No | Sì |
| Tempistiche | 4-5 settimane | 11-16 settimane + 4-5 settimane |
| Prezzo | + | ++ |
Siete interessati al nostro servizio di screening di librerie naive o alla costruzione di una libreria immunitaria ? Non esitate a contattare il nostro account manager dedicato.
Il processo del nostro servizio di anticorpi phage display
Approvvigionamento o progettazione dell’antigene e produzione
- Peptide/piccole molecole: coniugazione ai carrier
- Produzione di proteine inclusa sintesi genetica
- Cellula sovraesprimente la proteina target
Libreria immunitaria
Immune library
Libreria naive
Costruzione della libreria immunitaria
- Isolamento di PBMC
- Estrazione di RNA e sintesi del cDNA
- Amplificazione PCR di VH e VL
- Costruzione della libreria e QC
Screening e biopanning della libreria
- Screening della libreria naive o immunitaria contro l’antigene
- 4-6 cicli di biopanning
Screening ELISA di leganti a singoli fagi
- Screening e validazione mediante test ELISA fino all’identificazione di ameno 3-10 diversi leganti
Estrazione del DNA e sequenziamento dell’anticorpo
Contenuto del nostro servizio di anticorpi phage display
| Fase | Contenuto | Tempistiche | Prodotti forniti |
|---|---|---|---|
| Costruzione della libreria (solo per librerie immunitarie) |
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11-16 settimane |
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| Screening e biopanning della libreria |
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4-5 settimane |
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| Screening ELISA |
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| Estrazione del DNA e sequenziamento dell’anticorpo |
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Opzioni disponibili:
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Caso di studio: generazione di anticorpi contro una piccola molecola mediante phage display
REQUISITI DI PROGETTO
Un cliente ha richiesto un anticorpo umano realizzato contro una piccola molecola.
La piccola molecola è stata coniugata a diversi carrier per ottenere un coating ottimale.
È stato eseguito un biopanning utilizzando la nostra libreria naive umana ad alta diversità.
192 leganti di singoli fagi sono stati sottoposti a screening e validati mediante test ELISA.
Sono state necessarie 10 sequenze di anticorpi.
RISULTATI DEL BIOPANNING
| Cicli | Input fagi (pfu) | Output fagi (pfu) | |
|---|---|---|---|
| Panning con coating dell’antigene | Panning senza coating (controllo negativo) | ||
| 1 | 2.0×1012 | 8.9×106 | 3.4×106 |
| 4 | 1.0×1012 | 4.0×107 | 2.5×106 |
Si verifica un evidente arricchimento nei leganti anti-antigene, anche se è difficile rimuovere i leganti ai carrier (fenomeno noto).
TEST ELISA FAGI POLICLONALI
| Quantità di fagi (pfu/pozzetto) | Ciclo 3 | Ciclo 4 | ||
|---|---|---|---|---|
| Antigene | Controllo | Antigene | Controllo | |
| 6×1012 | 3.035 | 2.584 | 3.630 | 3.451 |
| 2×1012 | 2.798 | 1.709 | 3.308 | 3.007 |
| 6.7X1011 | 1.508 | 1.069 | 3.028 | 2.128 |
| 2.2×1011 | 0.5666 | 0.5024 | 2.976 | 1.885 |
| 7.4×1010 | 0.1712 | 0.1932 | 2.581 | 1.704 |
| 2.5×1010 | 0.08020 | 0.09040 | 2.033 | 1.317 |
| 8.2×109 | 0.06090 | 0.09140 | 1.931 | 1.054 |
| 2.7×109 | 0.01620 | 0.01740 | 0.7235 | 0.7526 |
| 9×108 | 0.01290 | 0.01460 | 0.2341 | 0.2432 |
Sebbene vi siano molti leganti non specificati (fenomeno noto), viene osservato un evidente arricchimento nei leganti anti-antigene (dati in grassetto).
TEST ELISA PER FAGI MONOCLONALI DEGLI 11 ANTICORPI UNICI IDENTIFICATI ("UNICI" SIGNIFICA "SEQUENZA UNICA")
| Cloni | Carrier Ag 1 | Carrier Ag 2 | Carrier Ag 3 | Senza coating | Carrier 1 | Carrier 2 | Carrier 3 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| A6 | 4.698 | 4.743 | 4.466 | 0.118 | 0.100 | 0.092 | 0.117 |
| A9 | 4.769 | 4.766 | 4.420 | 0.100 | 0.092 | 0.078 | 0.074 |
| B1 | 4.716 | 4.804 | 4.452 | 0.353 | 0.584 | 0.422 | 0.187 |
| B2 | 4.494 | 4.482 | 4.874 | 0.081 | 0.122 | 0.109 | 0.100 |
| D1 | 4.862 | 3.989 | 4.540 | 0.170 | 0.488 | 0.313 | 0.123 |
| D8 | 4.862 | 4.090 | 4.486 | 0.057 | 0.106 | 0.102 | 0.059 |
| F4 | 4.214 | 3.352 | 5.306 | 0.051 | 0.110 | 0.123 | 0.059 |
| H2 | 4.797 | 4.537 | 4.588 | 0.084 | 0.213 | 0.188 | 0.112 |
| H11 | 4.722 | 4.604 | 5.049 | 0.103 | 0.218 | 0.262 | 0.138 |
| 1A11 | 4.407 | 4.528 | 4.562 | 0.054 | 0.086 | 0.115 | 0.079 |
| 1G1 | 4.956 | 4.381 | 5.218 | 0.076 | 0.114 | 0.138 | 0.07 |
| loni | Carrier Ag 1 | Carrier Ag 2 | Carrier Ag 3 | Senza coating | Carrier 1 | Carrier 2 | Carrier 3 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| A6 | 4.698 | 4.743 | 4.466 | 0.118 | 0.100 | 0.092 | 0.117 |
| A9 | 4.769 | 4.766 | 4.420 | 0.100 | 0.092 | 0.078 | 0.074 |
| B1 | 4.716 | 4.804 | 4.452 | 0.353 | 0.584 | 0.422 | 0.187 |
| B2 | 4.494 | 4.482 | 4.874 | 0.081 | 0.122 | 0.109 | 0.100 |
| D1 | 4.862 | 3.989 | 4.540 | 0.170 | 0.488 | 0.313 | 0.123 |
| D8 | 4.862 | 4.090 | 4.486 | 0.057 | 0.106 | 0.102 | 0.059 |
| F4 | 4.214 | 3.352 | 5.306 | 0.051 | 0.110 | 0.123 | 0.059 |
| H2 | 4.797 | 4.537 | 4.588 | 0.084 | 0.213 | 0.188 | 0.112 |
| H11 | 4.722 | 4.604 | 5.049 | 0.103 | 0.218 | 0.262 | 0.138 |
| 1A11 | 4.407 | 4.528 | 4.562 | 0.054 | 0.086 | 0.115 | 0.079 |
| 1G1 | 4.956 | 4.381 | 5.218 | 0.076 | 0.114 | 0.138 | 0.07 |
Abbiamo generato 11 cloni unici che si legano in modo forte e specifico all’antigene della piccola molecola.
Il cliente ha deciso di esprimere questi 11 cloni come anticorpi ricombinanti e di richiedere lo screening di ulteriori 192 fagi singoli, operazione che ha determinato l’identificazione di 7 nuove sequenze uniche.
Scoprite le potenzialità dei nostri servizi di anticorpi phage display. Scaricate il report completo facendo clic sul pulsante “SCARICA IL REPORT PDF”.
Che cos'è un anticorpo phage display?
La tecnologia phage display comporta la determinazione dei partner di interazione di una proteina (interazioni proteina-proteina, proteina-DNA o proteina-peptide) che possono essere usati come “esca” per fagi di espressione di peptidi, proteine o anticorpi codificati da un’ampia libreria di DNA (che include tutte le sequenze codificanti di un dato organismo). In questo modo è possibile determinare la funzione della proteina.
Ciclo di phage display: libreria phage display, panning/biopanning e validazione mediante test ELISA
La tecnica phage display utilizza il fago filamentoso, un virus che sfrutta il batterio E. coli. Questo metodo si è dimostrato molto efficiente per l’interrogazione di librerie contenenti miliardi di proteine o peptidi differenti.
La tecnica phage display è stata applicata con grande successo su ampie librerie di anticorpi per l’isolamento di anticorpi monoclonali altamente specifici contro un antigene.
Questi nuovi metodi basati su librerie di miliardi di anticorpi espressi su fagi rappresentano alternative molto valide, che si sono dimostrate efficaci quanto le tecniche tradizionali per la generazione di miliardi di componenti e la selezione rapida finalizzata a identificare i candidati più interessanti per la ricerca.
In questi termini, la tecnica phage display è uno strumento all’avanguardia ampiamente usato per la scoperta di anticorpi terapeutici.
Vantaggi dell'anticorpo phage display?
Il vantaggio maggiore della tecnica phage display è rappresentato dalla struttura semplificata, dalla stabilità e conseguente affidabilità dei fagi, fattori che ne consentono l’applicazione a diverse superfici ma anche in vivo.
La caratteristica principale della tecnica phage display è l’accoppiamento fisico tra genotipo e fenotipo (il fago “visualizza” la proteina sulla propria superficie esterna e contiene il gene della proteina al suo interno). Ciò richiede l’introduzione artificiale di DNA codificanti nei fagi, che determina l’ampia diversità delle librerie di anticorpi basate su fagi. I frammenti di anticorpi ingegnerizzati generati mediante phage display da ProteoGenix includono formati di frammenti variabili a catena singola (scFv), presentazione di formati di anticorpi basati su Fab e anticorpi a dominio singolo (VHH).
Batteriofago M13 in anticorpo phage display
Tutte le librerie di anticorpi phage display di ProteoGenix sono costituite dal fago filamentoso M13, un virus che infetta il batterio E. coli. Questo batteriofago è il più usato per la tecnica phage display ed è appropriato per le vostre ricerche.
M13 è un fago filamentoso lisogenico, costituito da DNA circolare a singola elica chiuso in un sottile tubo flessibile, costituito da circa 2.700 copie di una proteina singola denominata pVIII, proteina di coating maggiore, e circa 5 copie di pIII, proteina di coating minore, posizionate alle estremità del tubo. L’infezione con M13 non è letale per il batterio e questi plasmidi vengono usati per numerosi processi di DNA ricombinante.
