SERVIZI
GARANTITI
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GARANTITI
Se per il progetto a cui state lavorando i test pronti all’uso, tra cui i kit ELISA, non forniscono un livello di validazione o accuratezza sufficienti, lo sviluppo di test personalizzati è il modo migliore per assicurare progressi nella ricerca. E quando si parla di servizi di sviluppo di test personalizzati, per la ricerca, marchiati CE o a scopo di IVD, ProteoGenix è la prima scelta delle aziende leader che si occupano di scienze della vita, oltre che di istituzioni e centri accademici di ricerca.
I servizi di sviluppo di test personalizzati ProteoGenix sono approfonditi e completi di tutto, visto che ci occupiamo nella stessa azienda di ogni aspetto, dallo sviluppo del test personalizzato in collaborazione con il cliente alla consegna del kit pilota. I test ELISA a Sandwich ed ELISA competitivo sono i formati che sviluppiamo più comunemente.
Sviluppo garantito di ELISA a Sandwich
Garantiamo la consegna dell’antigene e di una coppia di anticorpi che individua il target nei vostri campioni. Al termine del procedimento, vi forniamo campioni degli anticorpi e dell’antigene per verificare la conformità rispetto alle specifiche iniziali. Se siete soddisfatti, pagherete l’importo totale. Altrimenti, vi richiederemo il 50% del costo totale, solo se siamo riusciti a sviluppare un ELISA a Sandwich contro l’antigene. Pertanto, ci facciamo carico noi stessi della maggior parte del rischio dei nostri progetti di Ricerca e sviluppo o di diagnostica.
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Servizi di sviluppo di test personalizzati di
ProteoGenix:
dettagli del procedimento
Poiché abbiamo lavorato per molte aziende, laboratori e ricercatori con i nostri servizi di sviluppo di test ELISA personalizzati, abbiamo ormai definito e perfezionato una procedura accurata per lo sviluppo dei test che tiene in considerazione ogni aspetto della vostra ricerca, per produrre soluzioni adattabili a scopo di ricerca, CE o IVD. Ecco il procedimento che seguiamo per i servizi di test personalizzati:
Studio delle specifiche del test
Dopo che abbiamo ricevuto le vostre richieste, studiamo le specifiche fornite nel dettaglio, per capire gli obiettivi della vostra ricerca.
Progettazione della strategia per il test personalizzato
Dopo aver determinato che i kit ELISA, ELISA a Sandwich o le coppie di anticorpi esistenti non sono sufficienti a soddisfare le vostre necessità (specificità, sensibilità, reattività crociata, ecc.), progettiamo una strategia totalmente personalizzata per lo sviluppo del test, in collaborazione con voi. Questa fase è molto importante perché determina il successo del progetto. Esistono diverse strategie possibili per sviluppare un test che soddisfi requisiti specifici e ogni fase del procedimento è molto importante.
Sintesi genetica
La nostra strategia di sviluppo di test personalizzati comincia a prendere forma con la sintesi del cDNA a doppio filamento. Grazie ai controlli di qualità potenziati del nostro sistema, garantiamo un sequenziamento accurato al 100%, con un’efficienza complessiva di oltre il 99,9%. Perfezioniamo ulteriormente il nostro protocollo di sintesi genetica grazie alla mutagenesi genetica per rimuovere ogni possibile errore. Negli anni, ci siamo guadagnati la reputazione straordinaria di uno tra i migliori fornitori di servizi nell’ambito della produzione di reagenti personalizzati, a partire da un’accurata ottimizzazione e sintesi genetica. L’ottimizzazione e la progettazione genetica sono molto importanti per produrre nella fase successiva l’antigene più adatto.
Produzione della proteina/del peptide
La produzione accurata di catene proteiche o peptidiche ricombinanti con un fattore di rendimento sufficiente a permette lo sviluppo ulteriore di anticorpi è una fase fondamentale nello sviluppo di test personalizzati. Grazie a competenze approfondite in questo ambito, assicuriamo che il procedimento di sviluppo dei nostri test ELISA competitivi, ELISA a Sandwich o altri formati di test personalizzati si fondi su una base solida di anticorpi sviluppati con produzione efficiente di antigene della massima purezza.
La produzione della proteina/del peptide, a seconda dei requisiti del vostro progetto e degli obiettivi di ricerca, può anche essere espressa per la consegna del campione in sistemi più adatti, tra cui E.coli, B.subtilis, lievito, cellule di insetto (baculovirus) e cellule di mammifero, per diversificare le procedure a valle per lo sviluppo del test. Se necessario, il nostro gruppo di ricercatori esprimerà anche la proteina o il peptide ricombinante in tutti questi sistemi in parallelo, in modo da trovare le condizioni di espressione migliori e perfezionare la validità finale degli anticorpi utilizzati nel test personalizzato che ci avete commissionato.
Sviluppo di anticorpi primari
Mettiamo molta cura nello sviluppo degli anticorpi primari dal campione di antigene generato nella fase precedente. Come è noto, questo è probabilmente il procedimento più delicato nei progetti di sviluppo di test personalizzati ed è per questo motivo che abbiamo sviluppato, nel corso degli anni, conoscenze impareggiabili nell’ambito degli anticorpi monoclonali e policlonali.
Generazione di anticorpi monoclonali
- Sviluppo di ibridomi con immunizzazione genetica o semplice immunizzazione con antigene proteico
- Tecnica phage display avanzata con screening della libreria naive o immunitaria
- Garanzia di alto livello
- Consegna indipendente degli anticorpi monoclonali disponibile se necessario
Generazione di anticorpi policlonali
- Sistemi animali multipli per la generazione accurata di anticorpi policlonali con immunizzazione genetica o semplice immunizzazione con antigene proteico
- Garanzia di alto livello
- Consegna indipendente degli anticorpi policlonali disponibile se necessario
Servizi di analisi
In seguito alla produzione degli anticorpi primari desiderati, avviamo i nostri servizi di analisi. Prima della coniugazione, offriamo tre tecniche avanzate non proprietarie per la misurazione dell’affinità dell’anticorpo per calibrare i livelli di interazione biomolecolare.
- Risonanza plasmonica di superficie (SPR di Biacore™)
- Imaging di risonanza plasmonica di superficie (SPRi di HORIBA Scientific®)
- Rapid Extended Detection (Octet®RED by PALL Fortébio)
Coniugazione dell’anticorpo per il test ELISA a Sandwich
Il passo successivo nel nostro procedimento di sviluppo di test personalizzati è la coniugazione dell’anticorpo. Grazie alla purezza degli anticorpi prodotti nella fase precedente, siamo in grado di garantire che il risultato finale della coniugazione dell’anticorpo non conterrà catene proteiche o gruppi amminici residui che possono compromettere il processo di coniugazione. Utilizzando le tecniche più avanzate con una scelta di diversi metodi di marcatura, non lasciamo niente al caso quando si tratta di completare con successo questa fase cruciale per un accurato sviluppo di test personalizzati.
- Coniugazione rapida
- Processo a una fase singola per aumentare la precisione
- Coniugazione di almeno 10 anticorpi
Abbinamento della coppia di anticorpi per il test ELISA a Sandwich
Lavorando in maniera simmetrica alle procedure di sviluppo degli anticorpi primari (vedere la fase 5), determiniamo e sviluppiamo la coppia di anticorpi migliore (anticorpi di cattura e anticorpi di rilevazione) per il test ELISA a Sandwich personalizzato. Effettuiamo almeno 90 test di abbinamento per assicurare che venga selezionata la coppia più adatta. L’accuratezza di un kit ELISA a Sandwich sarà proporzionale all’abbinamento corretto ed è perciò importante utilizzare un fornitore esperto di servizi di sviluppo di test personalizzati come ProteoGenix, che conosce alla perfezione tutti i processi, dalla sintesi genetica alla produzione di kit pilota.
- Abbinamento accurato delle coppie di anticorpi
- Procedimento che permette di risparmiare tempo
- Tecniche di abbinamento avanzate per coppie uniche
- Test di abbinamento approfonditi (oltre 90)
Sviluppo e ottimizzazione del protocollo ELISA
In base all’unicità dell’antigene target e della sensibilità desiderata dell’anticorpo, procediamo quindi a sviluppare un protocollo ELISA ottimizzato (ELISA a Sandwich, ELISA competitivo o altro formato). Lo sviluppo del protocollo ELISA a Sandwich o ELISA competitivo avvicina il progetto di sviluppo del test personalizzato al termine. Lo scopo di questa fase è generalmente di ottimizzare il segnale, la sensibilità e la riproducibilità, riducendo allo stesso tempo il rumore di fondo al minimo.
Il test ELISA a Sandwich o ELISA competitivo personalizzato che è stato sviluppato viene quindi sottoposto a svariate procedure di aggiustamento per ottimizzare le seguenti caratteristiche verso l’antigene:
- La concentrazione della coppia di anticorpi
- La concentrazione del diluente
- La concentrazione dell’enzima coniugato
- La concentrazione del tampone
- L’accuratezza/intensità del segnale
- Il metodo di saturazione o blocking
Validazione del test
Verso la conclusione del processo di sviluppo del test ELISA personalizzato, il test personalizzato sviluppato viene validato sui campioni biologici assegnati per assicurare che la rilevazione della/e proteina/a endogena/e in questione avvenga con successo. La validazione del test garantisce anche che la rilevazione del target sia coerente con la proteina/il peptide ricombinante sviluppato.
Produzione del kit pilota ELISA
Dopo lo sviluppo e la validazione completi del test personalizzato, richiediamo l’approvazione del cliente per procedere con la produzione pilota dei kit. Rimanendo coerenti con il nostro approccio preciso a tutte le fasi dello sviluppo di test personalizzati, consegniamo tutti i reagenti necessari in stati completamente sviluppati e ottimizzati per facilitare l’uso del test personalizzato nel vostro laboratorio. Infine consegniamo decine o centinaia di kit pronti all’uso, comprese piastre pre-rivestite e tutti i reagenti necessari per effettuare i test.
Perché scegliere i servizi di sviluppo di test personalizzati di ProteoGenix?
- Soluzione integrata dalla sintesi genetica alla consegna dei kit pilota
- Servizi di ELISA a Sandwich personalizzati garantiti adatti alla vostra applicazione
- Prezzi competitivi, pacchetti completi per test personalizzati
- Tempo di produzione garantito di soli 8 mesi dalla sintesi genetica alla consegna dei lotti dei kit pilota del test ELISA a Sandwich sviluppato
- Assistenza completa da parte dei nostri esperti con dottorato di ricerca nello sviluppo di ELISA a Sandwich personalizzati e nello sviluppo di ELISA competitivi
- Competenza nei test ELISA all’avanguardia nel settore
Diamo impulso alla vostra ricerca, insieme!
Grazie alla migliore strumentazione disponibile, a ricercatori esperti altamente specializzati e a una reputazione che ci precede, noi di ProteoGenix siamo determinati a fornire nient’altro che i migliori servizi di sviluppo di test personalizzati, a un prezzo conveniente, con ottime garanzie, controllo di qualità completo e tempi di consegna rapidi.
Un passo nella direzione giusta vi permette di risparmiarne cento in quella sbagliata. Lasciate a noi la responsabilità di sviluppare e validare test personalizzati, in modo che voi possiate occuparvi della ricerca e andare lontano, molto lontano!
Facendo clic su “Contattaci” a destra potete entrare in comunicazione con noi, farci domande o richiedere un preventivo. Continuate a leggere per sapere di più su come i nostri servizi di sviluppo di test personalizzati possono farvi risparmiare tempo, fatica e denaro nei vostri progetti di ricerca.
La nostra competenza nello sviluppo dei test ELISA a Sandwich
Avendo sviluppato centinaia di saggi a partire dal 2003, ProteoGenix ha certamente competenze approfondite in diversi settori. Ecco i motivi per cui siamo superiori ai nostri concorrenti nello sviluppo di test personalizzati:
- Sviluppo di test personalizzati dall’inizio (accession number target)
- Soluzioni complete per test personalizzati, dalla sintesi genetica alla consegna dei kit pilota
- Tutti i processi specifici sono regolati da linee guida rigide per il controllo di qualità
- Competenze in target unici e test ad alte prestazioni/alta sensibilità
ProteoGenix vanta un team di scienziati esperti con esperienza in università, ricerca e aziende. Grazie a queste vaste conoscenze, abbiamo una competenza impareggiabile nella biologia molecolare, nell’ingegneria proteica, negli anticorpi e nell’immunologia e nella sintesi di peptidi.
Perché scegliere lo sviluppo di test personalizzati?
Anche se ProteoGenix offre diversi servizi ELISA personalizzati per diversi scopi, tra cui servizi di test ELISA diretti, servizi di test ELISA indiretti, servizi di test ELISA a Sandwich e servizi di test ELISA competitivi, spesso lo sviluppo di test personalizzati costituisce la soluzione migliore quando è richiesta la validazione/produzione di kit per progetti relativi a target o marcatori molto specifici. Lavoriamo con tecniche ELISA a Sandwich e ELISA competitive automatizzate per sviluppare le soluzioni migliori per voi. In base alla sensibilità e alla tecnologia richieste, siamo in grado di sviluppare test colorimetrici e test a fluorescenza.
I nostri servizi comprendono lo sviluppo di test per la scoperta di farmaci ma anche a scopo diagnostico o di ricerca.
Servizi di sviluppo di test personalizzati di ProteoGenix
Panoramica dei servizi
Collaboriamo da lungo tempo con ricercatori nei settori dell’accademia e dell’industria in tutto il mondo. Quindi, noi di ProteoGenix, sappiamo bene di che cosa avete bisogno a complemento di tutte le ore trascorse nella ricerca. Tenendo a mente le necessità dei ricercatori, abbiamo ideato un sistema completo per lo sviluppo di test personalizzati che vi toglierà la responsabilità della validazione e della ripetizione dei risultati.
CARATTERISTICHE PRINCIPALI
- Garanzie di successo impareggiabili
- Strategia di sviluppo dei test che si adatta agli obiettivi della vostra ricerca
- Ampia varietà di formati di test
- Alto livello di personalizzazione, secondo l’accession number target o le specifiche del biomarcatore
fornite da voi - Scoperta di biomarcatori mediante studi di interazione proteine-DNA (sistema Lievito One-Hybrid)
- Pacchetti tutto incluso, dalla sintesi genetica alla consegna dei kit pilota
- Prezzi competitivi, senza costi nascosti
- Assistenza post-consegna accurata da parte del nostro team di ricercatori esperti
CHE COSA OTTENETE CON I NOSTRI SERVIZI DI SVILUPPO DI TEST PERSONALIZZATI
- Strategia completa per lo sviluppo del test
- Previsione delle tempistiche per l’intero progetto
- Sviluppo del test personalizzato, dalla sintesi genetica alla consegna del rispettivo kit pilota (ELISA a Sandwich/ELISA competitivo/altro)
- Validazione del test
- Consegna di tutti i reagenti
- Assistenza per il trasferimento del test
- Documentazione
- Assistenza per l’implementazione
- Controllo di qualità dettagliato
- Consegna dei kit pilota
Sviluppo di test personalizzati:
ambiti di applicazione più comuni
Per decidere se il vostro progetto richiede lo sviluppo di un test personalizzato oppure se è possibile utilizzare un test standard pronto all’uso è bene valutare:
- L’unicità del target in questione
- La qualità dei kit esistenti
- La capacità dei kit esistenti di soddisfare le vostre esigenze in termini di sensibilità, formato del test, specie-specificità o reattività crociata
- La necessità di avere un proprio test per creare un vantaggio competitivo verso i concorrenti e ridurre il rischio di copie.
Se non siete in grado di decidere, contattateci e saremo felici di consigliarvi al meglio.
Ecco un elenco dei più comuni ambiti di applicazione dei test personalizzati:
- Biomarcatori per scoperta e sviluppo di farmaci
- Test immunologici per determinare l’efficienza dei vaccini
- Monitoraggio del drug delivery
- Sviluppo di kit diagnostici o prognostici
- Sviluppo e ottimizzazione di processi
- Ricerca industriale e accademica di base
- Validazione dell’espressione del target su diverse linee cellulari o estratti cellulari
- Test biologici per l’analisi di cibo o acqua
- Screening di tossicità avanzato
- Controllo di processi industriali
- Analisi di campioni ambientali
Sviluppo di ELISA a Sandwich in pratica:
lo studio di un caso tipico
Il modo migliore per dimostrare la nostra competenza nello sviluppo di test personalizzati è condividere un caso rappresentativo di un test per un biomarcatore che abbiamo sviluppato.
OBIETTIVI: IDENTIFICAZIONE DEL BIOMARCATORE PER IL TUMORE DELLA PROSTATA IN STADIO PRECOCE E SVILUPPO DI UN KIT PER IL BIOMARCATORE MEDIANTE ELISA A SANDWICH
Lo scopo di questo progetto era di sviluppare e ottimizzare un test per rilevare alti livelli di un biomarcatore specifico del tumore della prostata allo stadio precoce identificato in precedenza. I campioni di siero dei donatori per la validazione provenivano da individui sani, individui con tumore al seno e individui target, ovvero individui con tumore della prostata.
SCOPERTA DEL BIOMARCATORE
È stato sviluppato un protocollo standard One Hybrid System (OHS) di screening per identificare i regolatori di un target proteico comune di un farmaco antitumorale. La figura seguente (FIGURA 1) illustra il principio generico alla base dello screening OHS.
Principio del sistema OHS
Identificazione in vivo della proteina che lega il DNA grazie alla fusione con GAL4-AD e l’attivazione di un gene reporter
SVILUPPO DI UN PROTOCOLLO ELISA A SANDWICH PER IL BIOMARCATORE TARGET
Sono state seguite le fasi elencate di seguito per sviluppare un protocollo ELISA a Sandwich per il biomarcatore scoperto mediante lo screening OHS nella fase preliminare del progetto di sviluppo del test personalizzato.
- La produzione della catena di proteine ricombinanti è stata effettuata in volumi sufficienti e a una purezza oltre la soglia.
- 10 anticorpi monoclonali ad alta affinità sono stati sviluppati in un sistema con ibridomi.
- I 10 anticorpi monoclonali così sviluppati sono stati prodotti, purificati e coniugati.
- È stato effettuato un accurato abbinamento degli anticorpi, testando fino a 90 coppie per trovare l’accoppiamento più adatto.
- È stato sviluppato il protocollo ELISA a Sandwich ottimale per raggiungere una soglia di sensibilità sufficiente a rilevare il target nel siero del paziente.
- La coppia con i risultati corrispondenti più adatti è stata valutata su campioni biologici etichettati di un numero di donatori abbastanza ampio (donatori sani e pazienti con tumore).
- Alla mappatura degli epitopi è seguita la costruzione di un sistema di banca cellulare a doppio livello che consiste in una Master Cell Bank (MCB) e una Working Cell Bank (WCB).
ANALISI DEI DATI: DETERMINAZIONE DELLA COPPIA MIGLIORE PER ELISA A SANDWICH
Come descritto nella fase 4 precedente, un esperimento di accoppiamento degli anticorpi ha generato un set di valori altamente affidabili che sono stati tabulati ed analizzati in modo grafico ed empirico per determinare l’abbinamento migliore.
Il grafico seguente (GRAFICO 1) illustra in dettaglio i risultati degli esperimenti di abbinamento derivanti dall’abbinamento delle diverse coppie di anticorpi.
GRAFICO 1: DETERMINAZIONE DELLA COPPIA MIGLIORE PER ELISA A SANDWICH
Come è possibile notare chiaramente, l’anticorpo di rilevazione 48 e l’anticorpo di rilevazione 58 mostrano un ottimo abbinamento con l’anticorpo di cattura 17. Tra questi due candidati, la coppia formata dall’anticorpo di rilevazione 58 e dall’anticorpo di cattura 17 ha mostrato in maniera costante un abbinamento migliore. Quindi, l’analisi empirica e sperimentale di oltre 90 coppie ci ha permesso di individuare l’abbinamento migliore
ANALISI DEI DATI: OTTIMIZZAZIONE DEL TEST ELISA A SANDWICH
Individuata la coppia di anticorpi migliore, utilizzando un approccio ELISA a Sandwich, è stato creato un protocollo di rilevazione specificatamente ottimizzato. Ciò ha comportato la scelta e l’utilizzo di soluzioni di blocking appropriate, con periodi di incubazione idonei, diluizione degli anticorpi e altri parametri.
Il grafico seguente (GRAFICO 2) rappresenta i valori di concentrazione rispetto alla relativa DO, in una curva empirica altamente affidabile e accurata che può essere utilizzata in futuro per necessità di estrapolazione come parte del protocollo completo ELISA a Sandwich per questo test.
GRAFICO 2: DETERMINAZIONE DELLA SOGLIA DI RILEVAZIONE NEI CAMPIONI DI SANGUE
Conclusione: il protocollo ELISA a Sandwich ottimizzato permette la rilevazione del biomarcatore a una concentrazione di ≤0,2 ng/ml nei campioni di sangue dei pazienti.
ANALISI DEI DATI: VALUTAZIONE DEL TEST ELISA A SANDWICH PERSONALIZZATO SUI CAMPIONI BIOLOGICI
Il protocollo ELISA a Sandwich personalizzato è stato valutato utilizzando campioni di sangue da donatori sani, pazienti con tumore al seno e pazienti con tumore della prostata. Il protocollo ELISA ottimizzato è stato utilizzato per testare i livelli di biomarcatore nei campioni rispetto ai livelli di PSA.
Il grafico seguente (GRAFICO 3) illustra i livelli elevati di biomarcatore prostatico specifico dei pazienti con tumore della prostata rilevato dal protocollo ELISA a Sandwich personalizzato sviluppato da ProteoGenix, che permette quindi la distinzione categorica tra i pazienti non affetti da tumore della prostata (donatori sani e pazienti con tumore al seno) e quelli affetti da tumore della prostata. Questa distinzione è risultata più chiara e definita rispetto al test con il biomarcatore PSA.
GRAFICO 3: DETERMINAZIONE DEL LIVELLO DI ANTIGENE PROSTATICO SPECIFICO IN CAMPIONI DI SANGUE DI DONATORI SANI E PAZIENTI CON TUMORE (ELISA A SANDWICH)
È stato rilevato un notevole aumento del livello del biomarcatore prostatico specifico nei pazienti con tumore della prostata
CONCLUSIONE
Questo caso di studio rappresenta molto di più che semplici fatti, figure e dati. Questo tipo di progresso e l’ampia possibilità di personalizzare il procedimento di sviluppo del test, un compito altrimenti lungo, tedioso e di precisione, costituiscono uno strumento notevole a disposizione dei ricercatori. Lo sviluppo di test personalizzati fornisce soluzioni specifiche per i vostri progetti e vi permette di risparmiare tempo, energie e risorse che dovreste altrimenti utilizzare per cercare di utilizzare un test standard.
Principio per lo sviluppo di ELISA a Sandwich
Il metodo ELISA a Sandwich viene generalmente utilizzato per testare una proteina (in blu nella rappresentazione di seguito) in diversi tipi di campioni, ad esempio campioni di siero, utilizzando una coppia di anticorpi. L’anticorpo di cattura (in verde nella rappresentazione) viene distribuito sul fondo di piastre a 96 pozzetti mentre l’anticorpo di rilevazione (in rosso nella rappresentazione) permette il rilascio di un segnale di rilevazione. In un test ELISA a Sandwich, l’anticorpo di rilevazione può essere direttamente coniugato con biotina, HRP o AP (in giallo nella rappresentazione), ma è anche possibile utilizzare un anticorpo secondario coniugato per rilevarlo se l’anticorpo di cattura proviene da una specie ospite differente.
